混其勒-7抗炎镇痛作用及其机制初探

陈晓北 叶冬梅

（赤峰学院医学院，内蒙古 赤峰 024000）

混其勒-7抗炎镇痛作用及其机制初探

陈晓北 叶冬梅

（赤峰学院医学院，内蒙古 赤峰 024000）

目的研究蒙药混其勒-7对小鼠的抗炎镇痛作用，初步探讨其作用机制。方法采用耳廓炎症肿胀实验测定其抗炎作用，热板痛阈和醋酸扭体实验测定其镇痛作用，ELISA法测定小鼠血清中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的表达情况。结果中剂量混其勒-7可提高小鼠痛阈，减少扭体次数，并且改善二甲苯引发的炎症表现，其抗炎作用可能与TNF-α有关，而镇痛作用与TNF-α无关。结论混其勒-7具有抗炎镇痛作用，其抗炎作用可能与TNF-α有关。

混其勒-7；抗炎镇痛；TNF-α

蒙药混其勒-7，又名行气止痛丸，是由制马钱子、木香、沉香、红花、石膏、诃子和枫香脂组成的丸剂。收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册》（1998年版）[1]，具有开郁行气，活血止痛功能，主治胸闷、气短、胸胁刺痛、“巴木病”。目前研究资料显示，马钱子中的马钱子生物碱具有抗炎镇痛作用[2-3]，木香中的醇提物及倍半萜类有抗炎作用，其机制是因为它们既可抑制角叉菜胶、弗氏佐剂引起的大鼠足跖肿胀和炎性细胞的积累，又可抑制脂多糖诱导的白细胞介素-8、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）所致[4-5]。红花中长链6,8-双醇化合物及红花黄色素均有抗炎活性，其机制可能与该药可抑制炎症过程及肉芽增生有关[6]。虽然关于枫香脂及诃子无抗炎镇痛作用的报道，但它们常可以与其他蒙药配伍用于风湿、类风湿性疾病的治疗[7]。

TNF-α是单核巨噬细胞产生的强有力的促炎性反应的细胞因子，是机体炎性反应与免疫应答的重要调节因子，还能刺激滑膜细胞和软骨细胞合成并释放前列腺素E2、胶原酶等多种炎性介质，提高破骨细胞的活性和/或延长破骨细胞的存活期，导致关节局部滑膜炎症和软骨组织破坏，在类风湿性关节炎局灶性骨侵蚀的发病机制中起重要作用[8]。在本研究中，通过耳廓炎症肿胀实验、热板痛阈法和醋酸扭体实验及小鼠血清中TNF-α的表达情况，对混其勒-7的抗炎镇痛作用及其机制进行了初步探讨。

1 对象与方法

1.1 实验材料。仪器：电子分析天平，热板仪，酶标仪。药品及试剂：混其勒-7（由内蒙古赤峰市红山区中医院提供，分别配成浓度为25、12.5、6.3 mg/L的溶液）；复方乙酰水杨酸片（赤峰维康生化制药有限公司，国药准字H15020844，批号：130416，配成浓度为10 g/L的溶液）；冰醋酸、二甲苯（AR，汕头西陇化工厂，批号：0901051）；小鼠TNF-αELISA试剂盒（Rapidbio，美国，购自上海研辉生物科技有限公司）。

1.2 研究对象：昆明种雄性小白鼠，体质量18～22 g，由北京大学（医学部）提供。

1.3 测定方法

1.3.1 热板痛阈实验测定镇痛作用：取小鼠若干，置于热板上（55± 0.5） ℃，预选痛阈范围为10～25 s内的小鼠50只，随机分为5组，每组10只，分别为空白对照组（生理盐水）、乙酰水杨酸组（复方乙酰水杨酸溶液），低、中、高剂量组（浓度分别为6.3、12.5、25 mg/L的混其勒-7溶液），每组灌胃给药剂量为200 mL/kg，给药前禁食不禁水12 h，给药1 h后测痛阈，以（给药后痛阈值 - 给药前痛阈值）/给药前痛阈值，计算镇痛百分率。

1.3.2 醋酸扭体实验测定镇痛作用：取雄性小鼠50只，按2.1项分组给药，给药30 min后，每只小鼠腹腔注射0.7%冰醋酸溶液0.2 mL，观察并记录注射冰醋酸后5～15 min内小鼠的扭体次数。

1.3.3 二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验测定抗炎作用：取雄性小鼠50只，按2.1项分组给药，给药30 min后，用微量进样器将20 μL二甲苯均匀涂布于小鼠右耳致炎，左耳不处理作对照。致炎20 min后将小鼠处死，沿耳廓对称剪下两耳，用8 mm耳肿打耳器在两耳同一部位打孔，取下耳片，用电子天平称重并计算肿胀度及肿胀抑制率。公式：肿胀度（mg）=右耳重量-左耳重量。抑肿率（%）=（A-B）/A×100%（式中A：空白对照组平均肿胀度，B：用药组平均肿胀度）。

1.3.4 ELISA法测小鼠血清TNF-α浓度：将上述所有小鼠处死后立即经腹主动脉采血，放置2 h以后，3000转离心10 min，分离血清，-20 ℃冻存。最后按说明书的操作步骤测定小鼠血清TNF-α浓度。

1.4 统计学方法：数据资料采用（d）表示，各组间比较采用单因素方差分析。数据使用SPSS 17.0软件行统计学处理。

2 结 果

2.1 热板痛阈法测定药物镇痛作用的结果：见表1。

表1 药物对热刺激小鼠痛阈值的影响（，d，n=10）

表1 药物对热刺激小鼠痛阈值的影响（，d，n=10）

注：*P＜0.05，与空白对照组比较有统计学意义

组别 剂量 镇痛率(%)空白对照组 200.00(mL/kg) 16.42±4.33乙酰水杨酸组 200.00(mg/kg) 21.94±6.34*低剂量组 12.50(mg/kg) 17.68±3.21中剂量组 25.00(mg/kg) 21.63±5.49*高剂量组 50.00(mg/kg) 19.86±4.67

如表1所示，在给药1 h后测定各组小鼠痛阈，发现中剂量混其勒-7组和复方乙酰水杨酸组的镇痛率较对照组增高，P＜0.05，结果有统计学意义，而其余各给药组与对照组比较无显著性差异，说明中剂量混其勒-7有抑制热板刺激所致疼痛反应的作用。因为中剂量混其勒-7组与复方乙酰水杨酸组的镇痛率比较，P＞0.05，说明二者的作用强度相似。

2.2 醋酸扭体法测定药物镇痛作用的结果：见表2。

表2 药物对醋酸所致小鼠扭体反应的影响（，d，n=10）

表2 药物对醋酸所致小鼠扭体反应的影响（，d，n=10）

注：*P＜0.05，与空白对照组比较有统计学意义；△P＜0.05，与乙酰水杨酸组比较有统计学意义

组别 剂量 扭体次数(次)空白对照组 200.00(mL/kg) 32.14±5.67乙酰水杨酸组 200.00(mg/kg) 7.94±3.34*低剂量组 12.50(mg/kg) 28.68±4.65中剂量组 25.00(mg/kg) 19.85±6.67*△高剂量组 50.00(mg/kg) 31.53±6.29

从表2中可知，中剂量混其勒-7组和复方乙酰水杨酸组的小鼠扭体次数较对照组明显减少，P＜0.05，结果有统计学意义，但较复方乙酰水杨酸组扭体次数增多，并且P＜0.05，说明中剂量混其勒-7对醋酸所致的小鼠疼痛有抑制作用，但不如复方乙酰水杨酸的作用强。

2.3 二甲苯致小鼠耳肿胀实验结果：见表3。

从表3中可见，中剂量混其勒-7组和复方乙酰水杨酸组的小鼠耳肿胀度较对照组明显减轻，P＜0.05，结果有统计学意义，而两组之间无显著性差异，说明中剂量混其勒-7和复方乙酰水杨酸可以抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀的炎性反应，并且强度相似。

2.4 TNF-α表达的结果：见表4。

表3 药物对二甲苯所致小鼠耳肿的抑制作用（，d，n=10）

表3 药物对二甲苯所致小鼠耳肿的抑制作用（，d，n=10）

注：*P＜0.05，与空白对照组比较有统计学意义

组别 剂量 肿胀度(mg) 抑肿率(%)空白对照组 200.00(mL/kg) 24.82±5.68 -乙酰水杨酸组 200.00(mg/kg) 19.32±5.31* 23.40±3.87低剂量组 12.50(mg/kg) 22.54±4.36 9.19±2.64中剂量组 25.00(mg/kg) 17.22±4.18* 30.63±4.39高剂量组 50.00(mg/kg) 21.82±3.44 10.36±3.46

表4 各组小鼠血清TNF-α表达结果（ng/L，，d，n=10）

表4 各组小鼠血清TNF-α表达结果（ng/L，，d，n=10）

注：*P＜0.05，与空白对照组比较有统计学意义

组别 热板痛阈法 醋酸扭体法 二甲苯耳廓肿胀法空白对照组 112.51±2.78 112.11±2.45 111.03±2.18乙酰水杨酸组 120.37±2.04 115.56±2.66 99.87±3.12低剂量组 114.66±2.17 107.03±1.80 103.47±3.44中剂量组 115.84±2.52 118.47±2.42 96.42±1.99*高剂量组 114.34±2.34 113.34±2.20 100.11±2.60 F值 6.72 11.72 7.52

如表4所示，在二甲苯耳廓肿胀实验中，中剂量混其勒-7组小鼠血清TNF-α值较对照组降低，P＜0.05，结果有统计学意义，而其余各组之间比较均无显著性差异，说明混其勒-7的抗炎作用可能与TNF-α有关，而镇痛作用与TNF-α无关。在其余两个实验中，各组小鼠之间TNF-α表达无显著性差异。

3 讨 论

上述实验表明，混其勒-7可以提高小鼠对热刺激和化学物质引起的疼痛的耐受性，因此有一定的镇痛作用，对二甲苯引起的渗出性炎症有一定的改善作用。该药的抗炎作用可能与其降低TNF-α表达有关，而镇痛作用与TNF-α无关，但其抗炎镇痛的具体机制尚有待于进一步探讨。由于混其勒-7是由多种药物混合而成的，其质量难于控制，故其毒性成了限制其在临床应用的最大障碍，如在本研究中就发现，混其勒-7的安全范围远远低于理论值。因此，尽管混其勒-7有较好的抗炎镇痛作用，但是要想扩大其临床应用还有待于进一步深入研究。

[1]中华人民共和国卫生部药品标准(蒙药分册)[S].北京.中华人民共和国卫生部药典委员编印,1998:90.

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Hunqilu-7 Inflammatory and Analgesic Effect and Mechanism of Exploration

CHEN Xiao-bei, YE Dong-mei
(Chifeng University Medical College, Chifeng 024000, China)

ObjectiveTo study the Mongolian Hunqile-7 anti-inflammatory and analgesic effect in mice, a preliminary explore its action mechanism.MethodsUsing auricle inflammation swelling experiments show its anti-inflammatory action, hot plate pain threshold and acetic acid twisting experiment measure its analgesic action, ELISA method for determination of mice serum tumor necrosis factor alpha(tumor necrosis factor-α, TNF-α)expression.ResultsDose mixed in the Hunqile-7 can increase the pain threshold of mice, decrease the times of twisting the body and improve inflammation caused by xylene, its anti-inflammatory effects may be associated with the TNF-a, and analgesic action has nothing to do with the TNF-α.ConclusionMix the antiinflammatory and analgesic effects of Hunqile-7, its anti-inflammatory effects may be associated with the TNF-α.

Hunqile-7; Anti-inflammatory and analgesic; Tumor necrosis factor-α(TNF-α)

R971.1

B

1671-8194（2015）01-0022-02