日粮蛋白质水平对狮头鹅繁殖性能及相关激素水平的影响

张响英　唐现文　董然然　卞有庆

摘要：采用不同蛋白质水平日粮饲喂产蛋期狮头鹅，研究对其繁殖性能、血清激素水平、FSHβ及其受体表达量的影响。结果发现：日粮蛋白质水平能提高狮头鹅的产蛋率和孵化率，当蛋白质水平达到16%之后，产蛋数显著高于低蛋白质（13%）水平组；16%、17.5%和19%蛋白质组血清ALT活性均显著高于低蛋白质组（P<0.05），且随着日粮蛋白质水平增加，血清尿酸浓度呈上升趋势；16%、17.5%和19%蛋白质组的血清雌二醇浓度、垂体FSHβ表达量及卵巢FSHR表达量均显著高于13%蛋白质组，与产蛋数和孵化率呈现一致的变化趋势。试验结果显示，日粮蛋白质水平可通过调节狮头鹅的内分泌及相关基因表达提高其繁殖性能。

关键词：狮头鹅；日粮蛋白水平；繁殖性能；血清激素；FSHβ

中图分类号： S835.5 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2015）10-0259-03

养鹅是我国的传统特色养殖业，饲养量逐年递增，2012年我国鹅存栏量为3.5亿羽，占全球存栏总量的90%左右。由于鹅属于草食家禽，抗逆性和抗病力较强，鹅肉脂肪和胆固醇含量低，是理想的绿色食品，深受广大消费者青睐。但鹅是季节性繁殖动物，且具有性成熟晚、就巢性强、产蛋量少、雄性不育率高等缺点，严重制约了养鹅业的快速发展。目前，人们对提高种鹅繁殖力的研究大多集中在品种选育和杂交改良等方面，而且我国鹅的日粮营养水平大多参照美国、法国等国的饲养标准，不同的鹅种因品种特性和饲养环境的差异，对饲料的营养需要量也不尽相同。近年来，已有学者在不同鹅种上开展了营养需要研究，但产蛋期狮头鹅对蛋白质的需要尚未见报道。本研究以我国唯一的大型鹅种狮头鹅为研究对象，分析日粮不同蛋白质水平对产蛋期狮头鹅繁殖性能、血清生化指标、激素水平、FSHβ及其受体表达量的影响，探讨蛋白质水平与狮头鹅繁殖的关系，为产蛋期狮头鹅的饲养提出合理的日粮蛋白质水平，以提高狮头鹅的繁殖性能。

1 材料与方法

1.1 试验动物及设计

选取产蛋期健康狮头鹅种鹅80羽（公母比为1 ∶ 3）随机分成5个处理组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ），预试期14 d，正试期 90 d。日粮代谢能为11.00 MJ/kg，蛋白质水平分别为13%、14.5%、16%、17.5%、19%。试验在江苏农牧科技职业学院国家级水禽基因库进行，鹅舍为半开放式，设有陆地运动场和水面运动场，自由采食，自由饮水。每天按时捡蛋，统计各组产蛋数、蛋重、受精率和孵化率；在试验第60天每组各取8羽母鹅翅静脉采血10 mL，离心分离血清，-20 ℃保存；在试验第90天，每组取5羽健康狮头母鹅屠宰后立即摘取垂体和卵巢，快速用DEPC处理后，迅速投入液氮冷冻保存。

1.2 生化指标测定

采用日立7150型全自动生化分析仪测定血清总蛋白质（TP）、谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、尿酸（UA）等生化指标。

1.3 血清激素水平测定

利用全自动电化学发光免疫分析仪检测血清中PRL、孕酮和雌二醇浓度。

1.4 引物设计与合成

本研究根据鹅的FSHβ mRNA序列（GenBank 登录号：EU252532）、FSHR mRNA序列（GenBank 登录号：NM205079）和持家基因（GAPDH）mRNA（GenBank 登录号：AY436595）序列，应用Premier 5.0软件分别设计引物。引物信息见表1。

1.5 荧光定量PCR

利用Trizol试剂盒提取总RNA并反转录，然后进行荧光定量PCR测定。反应体系为50 μL：2× PCR buffer 25 μL，Primers（25 pmol/μL） 2 μL，灭菌DEPC水20.5 μL，模板cDNA 2.0 μL，SYBR Green Ⅰ 0.5 μL。反应条件为94 ℃ 预变性4 min ；94 ℃变性20 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35个循环；72 ℃检测信号。反应在FTC2000荧光定量PCR仪上进行，自动分析荧光信号并将其转换为CT值及溶解曲线图。每个样本设3个重复管，每份样本基因的表达强度用其对应的GAPDH基因的量进行校正，即ΔCT=CT（FSHβ或FSHR）-CT（GAPDH），不同组别FSHβ mRNA和FSHR mRNA 的相对表达量采用2-ΔΔCT法进行分析。

1.6 统计分析

数据用 x±s表示，采用SPSS 13.0中的ANOVA进行方差分析，LSD进行多重比较。

2 结果与分析

2.1 不同蛋白质水平对狮头鹅产蛋性能的影响

由表2可以看出，日粮不同蛋白质水平对狮头鹅产蛋数和孵化率的影响呈现相同的变化趋势，当蛋白质水平达到16%之后，每羽产蛋数和孵化率显著高于低蛋白（13%）水平组（P005）。

2.2 不同蛋白质水平对狮头鹅血清生化指标的影响

由表3可以看出，日粮不同蛋白水平对狮头鹅血清谷丙转氨酶（ALT）影响显著，试验Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组的ALT活性均显著高于试验Ⅰ组和试验Ⅱ组（P<0.05）；随着日粮蛋白质水平提高，血清尿酸浓度呈上升趋势，19%蛋白质组的尿酸浓度显著高于其他4组（P0.05）。

2.3 不同蛋白质水平对狮头鹅血清生殖激素的影响

由表4可以看出，各组血清催乳素（PRL）浓度差异不显著（P>0.05）；试验Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组的血清雌二醇浓度显著高于试验Ⅰ组（P<0.05），其他各组之间差异不显著；试验Ⅲ、Ⅳ组孕酮浓度显著高于试验Ⅰ组和Ⅱ组（P<0.05）。

2.4 不同蛋白质水平对狮头鹅垂体和卵巢组织中FSHβ相对表达量的影响

由图1可以看出，16%、17.5%和19%蛋白质组的垂体FSHβ相对表达量显著高于13%蛋白质组（P<0.05），卵巢FSHβ相对表达量各组差异不显著。endprint

2.5 不同蛋白质水平对狮头鹅垂体和卵巢组织中FSHR相对表达量的影响

由图2可以看出，卵巢中FSHR相对表达量较高，16%、17.5%和19%蛋白质组的卵巢FSHR相对表达量显著高于13%和14.5%蛋白质组（P<0.05）；垂体FSHR相对表达量较低，且各组差异不显著。

3 讨论

蛋白质是家禽最基本的营养需求之一，日粮蛋白质水平对家禽的产蛋量和蛋重均有重要影响。Bunchasak等报道，与日粮16%和18%粗蛋白质水平相比较，14%粗蛋白质水平显著降低了蛋鸡产蛋高峰期的产蛋性能[1]。Hussein研究发现，在蛋鸡产蛋期日粮中19%的粗蛋白质水平比17.5%粗蛋白质水平能显著提高蛋重[2]。本研究发现，日粮蛋白质水平对狮头鹅产蛋数和孵化率的影响呈现相同的变化趋势，当蛋白质水平达到16%之后，产蛋数和孵化率显著高于13%低蛋白组（P<0.05），这在溆浦种鹅也有类似的报道[3]。其原因可能为：日粮蛋白质摄入不足，导致蛋壳变厚、雏鹅啄壳困难，从而降低了受精蛋的孵化率。

血清生化指标是畜禽生命活动的物质基础，其含量及动态变化反映了机体各种新陈代谢和生理活动是否正常，并可作为调整饲养管理方式以及进行兽医临床诊断和治疗的参考依据[4-5]。本研究发现，16%、17.5%和19%蛋白质组的ALT活性均显著高于低蛋白质组（P<0.05），说明日粮高蛋白质水平可提高蛋白质的代谢率和饲料转化率。但日粮蛋白质过量则会导致尿酸生成增多[6]，本试验中19%蛋白质水平组血清尿酸浓度显著高于其他4组，说明日粮蛋白质水平过高，造成了部分蛋白质浪费，因此产蛋期狮头鹅的日粮蛋白质水平应低于19%。

禽类的生殖活动受生殖轴激素的调节，下丘脑促性腺激素释放激素（GnRH）的释放可促进垂体前叶释放促卵泡素（FSH）和促黄体素（LH），刺激卵巢上的卵泡发育，从而调节孕酮和雌二醇的释放，二者相互作用促使母禽产蛋[7-8]。对溆浦种鹅研究发现，血清孕酮与雌二醇浓度高的试验组产蛋率与蛋重也相对较高[3]。鸡血清雌二醇水平高的试验组产蛋率和蛋重也相对较高[9]。本试验发现，16%、17.5%和19%蛋白质组的血清雌二醇浓度显著高于13%蛋白质组，16%和17.5%蛋白质组的血清孕酮浓度显著高于13%蛋白质组，且血清雌二醇和孕酮浓度与产蛋量和孵化率呈现一致的变化趋势。可见，高蛋白质水平日粮能通过调节家禽下丘脑释放GnRH，促进孕酮和雌二醇的释放，从而提高产蛋性能。

FSH是垂体前叶嗜碱性细胞分泌的一种糖蛋白激素，可促进卵巢的卵泡发育和成熟。研究发现，FSH能提高鸡胚卵巢生殖细胞的增殖活性并存在一定的剂量效应关系，表明FSH可促进禽类生殖细胞的发育[10]。禽类产蛋期FSH不断刺激卵泡的产生、发育，直至形成成熟卵泡，在少量LH的配合下，刺激卵泡颗粒细胞的增生及与FSHR的结合能力[11-12]。本研究发现，16%、17.5%和19%蛋白质组的垂体FSHβ相对表达量和卵巢FSHR相对表达量均显著高于13%蛋白质组，与产蛋量变化趋势相一致。提示，高蛋白质水平可通过促进GnRH的释放提高FSH水平，刺激卵巢生殖细胞发育、成熟和排卵，FSH是调节卵泡正常发育和抗闭锁的重要因素之一，通过FSHβ及其受体表达的调控有望提高狮头鹅的产蛋性能。

参考文献：

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