盐酸阿霉素及其制剂的荧光分析

李妮妮，南叶飞，张洵立，唐璇

(西安石油大学 化学与化工学院，陕西 西安 710065)

阿霉素(ADM)是一种抗癌抗生素，其结构中含有糖苷和蒽环，广泛用于治疗肿瘤疾病。临床研究表明，它对白血病、骨肉瘤、乳腺癌及小细胞肺癌具有很好的疗效［1-3］。在这些相关研究和药物质量控制工作中，阿霉素检测方法有高效液相色谱法、放射免疫法等［4-5］，操作步骤复杂、价格昂贵。本文利用ADM 本身有天然荧光，采用荧光分光光度计建立直接荧光分析方法，检测盐酸阿霉素原料药及其注射制剂的含量。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

盐酸阿霉素原料药(＞99.5%)，工业品;注射用盐酸阿霉素;去离子水。

F97 荧光分光光度计;BSA224S 型分析天平。

1.2 溶液配制

盐酸阿霉素80.0 mg，用蒸馏水溶解至100 mL容量瓶中，作为盐酸阿霉素储备液，其浓度为2.76×10－3mol/L。

1.3 实验方法

取盐酸阿霉素储备液，加水稀释，配制不同浓度的溶液，用荧光分光光度计测定阿霉素的荧光激发波长和荧光发射波长。仪器参数为:扫面速度1 000 nm/min，扫面间隔1.0 nm，激发带宽10 nm，发射带宽10 nm，增益设为中。

2 结果与讨论

2.1 测定波长选择

盐酸阿霉素储备液加水稀释到6. 98 ×10－5mol/L，用硫酸调pH =6.3［6］，测定荧光激发波长和荧光发射波长，结果见图1。

由图1 可知，盐酸阿霉素的最大激发波长λex=469 nm，最大发射波长λem=593 nm。

图1 盐酸阿霉素的荧光光谱Fig.1 Fluorescence spectrum of doxorubicin hydrochloride

2.2 盐酸阿霉素的荧光强度和浓度的关系

盐酸阿霉素储备液加水稀释，测定荧光强度，结果见表1。

表1 盐酸阿霉素浓度与荧光强度的关系Table 1 The relationship of doxorubicin hydrochlorideconcentration and fluorescence intensity

由表1 可知，盐酸阿霉素的浓度在6. 98 ×10－5mol/L时荧光强度最大，只有在一定的浓度范围内，盐酸阿霉素的浓度与其荧光强度呈正相关的关系。故选择药物浓度低于6.98 ×10－5mol/L 的溶液进行盐酸阿霉素的标准曲线的研究。

2.3 标准曲线的绘制

盐酸阿霉素储备液加水稀释成0.99 ×10－7，2.46 ×10－6，4.91 ×10－6，9.82 ×10－6，1.29 ×10－5，1.97 ×10－5mol/L 浓度的溶液，测定荧光值，盐酸阿霉素荧光强度-浓度标准曲线，见图2。

图2 盐酸阿霉素的标准曲线Fig.2 The standard curre of doxorubicin hydrohloride

由图2 可知，浓度在9. 90 × 10－8～1. 97 ×10－5mol/L范围内具有较好的线性关系，线性方程为y=12.124x+104.81，R2=0.994 5。

2.4 盐酸阿霉素的检测限

配制浓度9.82 ×10－10mol/L 的盐酸阿霉素溶液，以二次蒸馏水作为空白对照，测定荧光强度，结果见表2。

表2 盐酸阿霉素的检测限Table 2 The determination of detection limit of doxorubicin hydrochloride

由表2 可知，9.82 ×10－10mol/L 盐酸阿霉素的荧光强度的平均值F =2.14，标准偏差S =0.032。

其检测限［7］。

2.5 盐酸阿霉素的稳定性

对9.82 ×10－5mol/L 盐酸阿霉素溶液在不同时间内进行荧光检测，结果见表3。

表3 盐酸阿霉素稳定性Table 3 Doxorubicin hydrochloride stability

由表3 可知，不避光保存条件下，盐酸阿霉素溶液荧光强度在1 h 内略有下降，10 d 后明显减弱，一个月后减弱了近1/2 多。避光保存时，荧光强度相对稳定，符合药物含量检测的要求。

2.6 盐酸阿霉素的回收率

对浓度分别为1.24 ×10－5，4.31 ×10－6，4.97 ×10－7mol/L 的阿霉素溶液测定荧光值，每组测5 次，取平均值，其平均回收率见表4。

表4 盐酸阿霉素的回收率Table 4 The recovery rate detection of doxorubicinhydrochloride

2.7 样品分析

2.7.1 制剂含量的检测 准确称取盐酸阿霉素制剂2.1，3.0，3.5 mg 分别置于50 mL 的容量瓶中，用蒸馏水溶解、定容，测定荧光值，平行5 次，扣除空白对照，由标准曲线计算浓度、分别为8. 79 ×10－6，1.27 ×10－5，1.49 ×10－5mol/L，含药率，结果见表5。

表5 阿霉素制剂的含药量Table 5 The including the dosage of detection of ADM doxorubicin hydrochloride injection

2.7.2 加标回收率 准确称取盐酸阿霉素注射剂6.5 mg，置100 mL 容量瓶中，用蒸馏水溶解、定容。称取阿霉素3.9 mg，用蒸馏水溶解在50 mL 的容量瓶中，其浓度为1.34 ×10－4mol/L。按低、中、高三个不同水平将其加入待测样品溶液，测定加标回收率，见表6。

分别量取10 mL 盐酸阿霉素注射剂溶液，置于3 个50 mL 容量瓶中，分别加入0.5，1.0，1.5 mL。

浓度1.34 ×10－4mol/L 的阿霉素溶液，用蒸馏水定容，测其荧光强度，平行3 次，取平均值，然后计算回收率。

表6 盐酸阿霉素的加标回收率Table 6 Standard addition recovery rate test of doxorubicin hydrochloride

3 结论

采用荧光分光光度计检测盐酸阿霉素的含量，在 盐 酸 阿 霉 素 浓 度9. 90 × 10－8～1. 97 ×10－5mol/L，荧光强度和浓度呈良好的线性关系，相关系数R 为0.994 5，回收率98.91% ～101.0%，注射用盐酸阿霉素的含药量12. 24%，加标回收率100.32% ～102.19%。荧光分析法测定盐酸阿霉素具有操作简单、精密度高、检出限低等优点，能够用于盐酸阿霉素原料药及其制剂的检测。

［1］ Liu X，Chen Z，Chua C C，et al.Melatonin as an effective protect-tor against doxorubicin-induced cardiotoxicity［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2002，283(1):H254.

［2］ 韩锐.肿瘤化学预防及药物治疗［M］.北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1994:266-272.

［3］ 国家医药管理局，医药工业情报站编.新药指南［M］.北京:中国医药科技出版社，1990:458-459.

［4］ Gilbert C M，Filippich L J，MoGeary R P，et al.Pharmacokinetics of doxorubicinol in dogs［J］. J Vet Pharmacol Ther，2006，29(5):433-438.

［5］ Lewis A L，Taylor R R，Hall B，et al.Pharmacokinetic and safety study of doxorubicin-eluting beads in a porcine model of hepatic arterial embolization［J］. J Vasc Interv Radiol，2006，17(8):1335-1343.

［6］ 李桂云. 荧光分析法测定注射用的盐酸阿霉素含量［J］.中国药物与临床，2013(13):26-27.

［7］ Hernandez F H，Escriche J M. Fluorimetric detemination of aluminium with morin after extraction with isobuty methyl ketone［J］.J Analyst，1984，119(2):1585-1592.