三合激素在奶牛乳中的降解规律

卢春霞++刘长彬++唐宗贵等

摘要：研究三合激素在奶牛乳中的降解规律，试验选择卵巢静止的9头泌乳奶牛，随机分为2组，5头为试验组，注射治疗三合激素后，4头为对照组不注射激素，间隔不同的天数采集每头牛的乳样品。分别采用液相色谱-串联质谱法和气相色谱-质谱法检测乳中激素的残留量。结果表明，14 d后3种激素在奶牛乳中的浓度降至0.5 ng/g 以下，表明奶牛注射三合激素后14 d可降解完全，确定苯甲酸雌二醇的弃奶期为 14 d。

关键词：苯甲酸雌二醇；孕酮；丙酸睾酮；生鲜乳；降解规律

中图分类号： TS201.2文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）11-0378-02

收稿日期：2015-04-22

基金项目：国家科技支撑计划（编号：2012BAD43B03）。

作者简介：卢春霞（1978—），女，河南虞城人，博士，副研究员，主要从事食品质量安全研究。E-mail：shzlcx2002@163.com。

通信作者：罗小玲，研究员，主要从事食品质量安全研究。Tel：（0993）6683009；E-mail：LXL62 622@126.com。 三合激素注射液（tristerone injection）为复方制剂，主要成分包括苯甲酸雌二醇1.5 mg/mL、孕酮12.5 mg/mL、丙酸睾丸酮25 mg/mL，在奶牛养殖业中主要用于诱导奶牛发情[1-2]。雌二醇可在动物组织内残留，通过食物链危害人类健康，使女性儿童提前发育，男性儿童乳腺发育呈女性化，男性生殖系统发育异常或引起病变，并导致女性乳腺癌和子宫内膜异位症发生率上升[3-4]。中华人民共和国农业部公告第235号规定，丙酸睾酮和苯甲酸雌二醇允许作治疗用，但不得在动物性食品中检出，孕酮没有限制使用，也无限量标准[5]。通过测定丙酸睾酮、苯甲酸雌二醇和孕酮在牛奶中的残留，可对药物安全性作出评价，为休药期的制定和提高原料乳质量安全水平提供科学依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1试验动物选择卵巢发育静止、正常泌乳的荷斯坦奶牛9头。

1.1.2试剂与药品Oasis HLB固相萃取柱（60 mg /3 mL，Waters公司）；丙酮、正己烷（色谱级，美国J. T. Baker公司）；乙腈、甲醇、乙酸乙酯、吡啶、异辛烷（色谱级，德国Merck公司）；甲苯（色谱级，德国CNW公司）；苯甲酸雌二醇、孕酮、丙酸睾酮标准品购自中国国家标准物质中心；三合激素注射液（2 mL/支，宁波第二激素厂生产）。其他试剂均为分析纯，试验用水为超纯水。

1.1.3仪器设备Agilent 1200高效液相色谱仪，6460 Triple Quad LC/MS电喷雾串联四极杆质谱仪（美国Agilent公司）；7000B Triple Quad GC/MS四极杆质谱仪（美国Agilent公司）；MS3 basic涡旋混合器（德国IKA公司）；3-30K高速台式冷冻离心机（德国SIGMA公司）；R-210旋转蒸发仪（瑞士步琦公司）；KQ-500DB超声波清洗器（昆山市超声仪器公司）；优普超纯水制造系统（成都超纯科技公司）。

1.2方法

1.2.1给药方法试验牛头每头肌肉注射4支三合激素，注射后1、2、3、5、9、14 d采集牛奶。奶样置-20 ℃冰箱中保存待测。

1.2.2检测方法孕酮和丙酸睾酮参照农业部1031 号公告[6]检测。苯甲酸雌二醇检测参考GB/T 22967—2008方法[7]稍作修改。

2结果与分析

2.1丙酸睾酮的残留

从图1可以看出，5头试验牛丙酸睾酮的降解规律基本一致，于注射药物后2～3 d在体内残留达到高峰，然后逐渐降解，基本在第9天完全降解。但是每头牛在不同日期残留量差异较大，可能与个体差异有关。对照组丙酸睾酮含量基本在1 ng/g以下。

2.2孕酮的残留

与丙酸睾酮比较，孕酮降解较快（图2），基本于第5天完全降解，但E牛在第5天的降解呈非规律性。对照组孕酮含量基本为0 ng/g。

2.3苯甲酸雌二醇的残留

从图3可以看出，试验组牛苯甲酸雌二醇的降解规律基本一致，于药物注射后2～3 d在体内残留达到高峰，然后逐渐降低，基本在第14天降解完全。对照组苯甲酸雌二醇含量基本在0 ng/mL。

从以上3种激素的体内降解规律来看，在处理后14 d内完全降解，三合激素的安全间隔期为 14 d，与黄冻的研究结果[8]一致。

2.4激素风险因子监测结果

利用以上检测方法对新疆天山北坡6个规模化牛场的生鲜奶进行监测，每个牛场抽取样品5份。从图4可以看出，丙酸睾酮、苯甲酸雌二醇残留量较低（<1 ng/g），而孕酮激素残留量较高，可能与怀孕牛本身产生的孕酮有关。

3结论

采用液相色谱-串联质谱法和气相色谱-质谱法研究了三合激素在奶牛乳中的降解规律。结果表明，奶牛注射三合激素后，乳中3种激素在14 d内均可降解完全，确定丙酸睾酮、孕酮、苯甲酸雌二醇的安全间隔期为 14 d。同时对6个规模化牛场生鲜乳进行监测，结果表明，生鲜乳中孕酮激素含量较高，丙酸睾酮、苯甲酸雌二醇均无残留。

参考文献：

[1]李佳荣，黄汉标，赵国山. 利用激素提高隐性发情奶牛受胎率试验研究[J]. 现代农业科技，2012，17（14）：250-251.

[2]张安哲，许瑞忠. HCG配合三合激素治疗奶牛卵巢静止效果好[J]. 中国奶牛，2006（7）：58-59.

[3]Hügel S，Horn M，Remkes H，et al. Preservation of cardiac function and energy reserve by the angiotensin-converting enzyme inhibitor quinapril during postmyocardial infarction remodeling in the rat[J]. Journal of Cardiovascular Magnetic Resonance，2001，3：215-225.

[4]杨杏芬. 环境雌激素污染与毒效应研究的现状与展望[J]. 广东卫生防疫，2001，27（1）：20-24.

[5]中华人民共和国农业部年第235号公告：动物性食品中兽药最高残留限量[Z]. 北京：中华人民共和国农业部，2002.

[6]中华人民共和国农业部第1031号公告[Z]. 北京：中华人民共和国农业部，2008.

[7]GB/T 22967—2008牛奶和奶粉中β-雌二醇残留量的测定气相色谱-负化学电离质谱法[S].

[8]黄冻. 苯甲酸雌二醇注射液稳定性试验及其在奶牛体内药动学和牛奶中残留试验[D]. 杨凌：西北农林科技大学，2009.史娟，李江. 微波辅助消解火焰原子吸收光谱法测定茶叶中的微量元素[J]. 江苏农业科学，2015，43（11：380-382.