瓠瓜CGMMV的综合防控策略

吴新义，吴晓花，徐 沛，汪宝根，鲁忠富，李国景

（浙江省农业科学院蔬菜研究所，浙江杭州 310021）



瓠瓜CGMMV的综合防控策略

吴新义，吴晓花，徐 沛，汪宝根，鲁忠富，李国景

（浙江省农业科学院蔬菜研究所，浙江杭州 310021）

摘 要：黄瓜绿斑驳花叶病毒（CGMMV）是瓠瓜生产中的重要病害。本文从CGMMV的发病特点及当前防治该病的研究现状出发，提出瓠瓜上针对CGMMV的综合防控策略。即选育抗CGMMV的瓠瓜品种；从源头控制，确保生产中使用的种子和种苗无毒；加强田间操作管理，避免接触性传染。

关键词：瓠瓜；CGMMV；综合防控

文献著录格式:吴新义，吴晓花，徐沛，等.瓠瓜CGMMV的综合防控策略［J］.浙江农业科学，2016，57（6）: 895-898.

瓠瓜［Lagenaria siceraria（Molina）Standl.］，又名瓠子、长瓜、蒲瓜、夜开花、葫芦等，隶属葫芦科葫芦属，为一年生攀缘性草本植物。瓠瓜是我国南方地区夏季重要的瓜类蔬菜作物，也是嫁接西瓜、黄瓜首选的砧木。黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumbergreen mottlemosaicvirus，CGMMV）是近年来新传入我国的有害生物，由于该病毒传播迅速、为害严重，因此对瓠瓜生产造成极大的威胁。本文提出了一套综合防控CGMMV的策略，为我国瓠瓜乃至葫芦科作物防治CGMMV提供理论参考。

1 CGMMV基本情况

CGMMV属于芜菁花叶病毒科烟草花叶病毒属的一种，主要侵染黄瓜、西瓜、甜瓜、瓠瓜、南瓜等葫芦科作物，对产量损失高达15%以上［1］。CGMMV为杆状病毒，长约300 nm，直径约18 nm，包含一个6.4 kb的正链基因组RNA［2-3］。CGMMV适生性和抗逆性极强，所有株系都是极端稳定的，其致死温度为90～100℃，稀释限点10-6～10-7，常温下病毒侵染力可保持数月，在0℃下可保持数年［4］。CGMMV侵染植株后，主要引起叶片斑驳褪绿、花叶，果实出现水渍、纤维化［5］。该病最早于1935年在英国黄瓜上发现，随后在德国、芬兰等许多国家都有报道［6-7］。CGMMV曾在日本和韩国大面积爆发，对两国的西瓜和甜瓜生产造成毁灭性打击，至今仍是生产中的严重问题［5，8］。目前，该病已经在欧洲、中亚、东亚、南亚等30多个国家和地区发现，被许多国家列为葫芦科植物上的重要检疫性病毒［4］。

2 CGMMV在中国的发生与研究

我国最早于2002年从日本进口的种苗中截获到CGMMV，随后检疫部门多次在进境的葫芦科种子中检测到CGMMV病毒［9-12］。2003年，该病在我国东北地区的西瓜和黄瓜田间首次发现，2005年在辽宁省爆发，造成西瓜产量大面积减产［13］。在瓠瓜上，任春梅等［14］报道在江苏仪征的露地瓠瓜病叶上检测到CGMMV病毒；赵慧茹等［15-16］在嫁接西瓜使用的砧木种子上也检测到CGMMV病毒。目前，在我国十多个省份的葫芦科作物上都检测到CGMMV病害［15］。鉴于CGMMV对我国葫芦科作物的严重为害，农业部已将CGMMV确定为全国农业植物检疫性有害生物，属国家三类检疫性病害（农业部第788号公告）［17］。

自CGMMV病毒在我国发现以来，我国学者从植物保护、植物病理、遗传育种等多个角度对该病毒进行了研究。在CGMMV病毒的检测方面，Shang等［18］比较了ACP-ELISA，TAS-ELISA，DBIA，DTBIA，IC-RT-PCR等5种血清学方法检测CGMMV病毒的专化性和灵敏性，发现前4种方法适合于常规、大批量检测，而IC-RT-PCR的灵敏性最高，适合于获取病毒基因组信息。此外，我国学者还发表了基于一步法的反转录环介导等温扩增法（RT-LAMP）用于快速检测CGMMV病毒［19］。在病毒分子生物学研究方面，陈红运等［20］首先利用RT-PCR方法克隆了辽中地区西瓜CGMMV分离物，并进行了全基因组测序与分析；田永蕾等［21-23］也对北京、山东、海南的西瓜上CGMMV分离物进行了全基因组测序，系统进化分析显示我国的CGMMV分离物与韩国的同源性最高，因此我国西瓜上出现的CGMMV病毒可能是从韩国种子传入的。最近，浙江省农业科学院分离和测定了浙北地区侵染瓠瓜的1个CGMMV病毒株系全序列，其基因组全长为6 423 bp，并构建了农杆菌介导的CGMMV侵染性克隆［24］。在CGMMV的传播方面，多个研究报道显示，CGMMV在葫芦科作物上以种子表面带毒为主，带毒率高，但传毒率很低［16，25］。

3 CGMMV的防治策略研究

CGMMV是葫芦科作物上的世界性难题，目前没有有效的化学药剂可防治CGMMV。通过保守的方法可以在一定程度上减轻CGMMV的为害，如使用消毒种子、通过改进栽培技术培育健壮植株、田间及时铲除发病单株、使用抗病品种、利用杀虫剂切断病毒的传播载体等［26］。带毒种子是CGMMV远距离传播的主要途径，因此加强种子管理是当前防治该病害最切实可行的办法。日本和韩国在防治CGMMV方面的经验表明，干热处理可大大减轻发病程度、甚至不发病，是钝化CGMMV最有效的方法，但其钝化病毒的原理还不清楚［27-28］。在我国，蔡明等［27，29］研究了干热处理和药剂处理对种子中CGMMV病毒的钝化效果，并报道干热处理会引起种子的发芽率下降，对不同品种和同一品种在不同生产条件下生产的种子影响不同。马凯慧等［30］研究了瓠瓜种子干热处理对CGMMV的钝化效果及发芽率的影响，认为72℃是处理瓠瓜种子最佳的温度；宋顺华等［16］的研究也取得了相同的结果。此外，李俊香等［31］还研究了化学诱抗剂对CGMMV的防治效果，发现2，1，3-苯并噻二唑（2，1，3-Benzothiodiazole，BTH）、芸薹素内酯（Brassinolide，BL）、壳聚糖（Chitosan Oligosaccharide，CTS）和水杨酸（SalicylicAcid，SA）均能诱导瓠瓜对CGMMV产生抗性，其抗性差异与诱抗剂种类、浓度及诱导时间相关。

转基因技术是防治CGMMV的另一重要策略，该方法是将一段病毒的基因序列转入植物基因组，通过转录后基因沉默、RNA干扰等方法使转基因植株获得对病毒的抗性［32-33］。如Park等［34］向嫁接西瓜转入单拷贝的CGMMV衣壳蛋白基因，获得的转基因植株对CGMMV具有抗性；Emran等［35］利用农杆菌介导的方法将CGMMV的运动蛋白基因转入甜瓜中并获得对CGMMV抗性提高的转基因后代。采用类似方法，Lin等［36］向西瓜转入一个包含有西瓜银色斑驳病毒（WSMoV）和CGMMV衣壳蛋白基因片段的杂合病毒，也获得了抗CGMMV的转基因后代。

4 瓠瓜CGMMV综合防控策略

现阶段，瓠瓜上CGMMV的发生尚处于萌芽阶段。根据CGMMV的传播特点及现有的研究知识，本文提出一套CGMMV综合防控的策略，为瓠瓜生产中CGMMV的防治提供参考。

4.1 选育抗CGMMV的瓠瓜品种

选育抗病品种是防治病害最经济有效的方法。目前国内还没有抗CGMMV的瓠瓜品种或砧木品种，因此育种工作者应将选育抗CGMMV品种列为重要的育种目标。育种工作者可利用已构建好的基于农杆菌介导的CGMMV侵染性单克隆［24］，对国内外瓠瓜种质CGMMV抗性进行大规模鉴定，筛选抗CGMMV的种质，通过常规的回交转育，培育抗病品种。此外，多个CGMMV分离物的全基因组序列已公布，利用转基因技术将其中的mp和cp基因片段转入瓠瓜中，有望获得提高抗性的转基因后代，进而结合传统育种手段选育出抗病品种。

4.2 从源头控制，确保种子和种苗无毒

CGMMV主要以种子传播为主，确保使用无毒的种子可从源头阻断该病毒的传播。从以下几个措施做起。（1）瓠瓜种子制种基地应选择无CGMMV侵染的田块，种植前应对土壤进行消毒。（2）原种应进行干热处理或药剂处理以钝化病毒，并对消毒后的种子进行生物学检测，确保原种不带毒。（3）种子生产过程中应加强田间管理，培育健壮植株；严格监视制种过程的CGMMV病株，一经发现立即销毁，并对周围植株进行后续观察。（4）种子应分级采收，有疑似CGMMV病症的瓠瓜应特殊标记，确保不同等级的种子不混杂。（5）种子播种前必须进行干热处理和药剂处理，干热处理的标准程序为:加热至35℃恒温处理24 h，加热升温至50℃处理24 h，再次加热至72℃处理72 h，最后自然降温至室温后结束处理。药剂处理可以选择10%磷酸三钠、1.25%Tsunami水溶液等消毒剂，将种子浸泡20～60 min.，自然晒干即可。消毒后的种子应使用DAS-ELISA检测处理效果，特别是检测实生苗真叶中是否含有CGMMV，若在实生苗中检测到阳性CGMMV，则对应批次的种子应重新消毒、重新检测，直至确保整批种子无毒为止。

4.3 加强田间管理，避免接触性传染

重视土壤消毒。CGMMV的所有株系都极其稳定，病株的残体及根系中的CGMMV可在土壤中长期保持活力，对土壤进行消毒可以防止CGMMV传播到无毒的种子或种苗上。土壤消毒一般采用施加生石灰、市售土壤消毒剂等，结合高温天气加快土壤中残渣的分解，降低CGMMV的传染几率。已发现病情的田块最好不要连续种植葫芦科作物，尤其是西瓜，有条件的应实施水旱轮作。

规范农事操作。瓠瓜整个生产过程涉及到播种、移苗、绑蔓、整枝、授粉、采瓜等农事操作，各环节操作时应特别小心，防止接触到CGMMV侵染的病叶造成交叉感染。若接触到病叶或结束一批操作后，都应洗手并对农具消毒，可用肥皂水、10%脱脂奶粉液洗手，用10%脱脂奶粉液、10%磷酸三钠、肥皂水和杀菌剂等对农具消毒。

改善栽培措施。加强肥水管理，培育健株壮苗，提高瓠瓜植株自身对CGMMV的抵抗力。田间一旦发现有病植株，应连根拔起，在瓠瓜种植区外集中销毁。从苗期开始，通过喷施农药及时防治病虫害，避免蚜虫、甲虫等昆虫带来的病毒传播。

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（责任编辑：张瑞麟）

中图分类号：S436

文献标志码：B

文章编号：0528-9017（2016）06-0895-04

DOI：10.16178/j.issn.0528-9017.20160632

收稿日期:2016-03-10

基金项目:浙江省公益性项目（2015C32042）；农业部公益性行业（农业）科研专项（201403032）

作者简介:吴新义（1984—），男，河南南阳人，助理研究员，博士，从事瓠瓜、豇豆基因组学及分子育种研究工作，E-mail: wuxinyi @mail.zaas.ac.cn。

通信作者:李国景（1966—），男，浙江东阳人，研究员，博士，从事蔬菜育种与栽培技术研究工作，E-mail: ligj@mail.zaas.ac.cn。