CRLF2实时定量PCR检测方法的建立及初步应用*

基金项目:江西省自然科学基金项目(20114BAB215031)；江西省卫生厅科技计划项目(20141152)。



CRLF2实时定量PCR检测方法的建立及初步应用*

*基金项目:江西省自然科学基金项目(20114BAB215031)；江西省卫生厅科技计划项目(20141152)。

付晶晶，李红△，易丽君，乐萍，黄慧

(江西省儿童医院中心实验室，江西南昌 330006)

摘要:目的建立人细胞因子受体样因子2(CRLF2)实时定量PCR检测方法。方法设计特异性引物扩增目的基因CRLF2及管家基因ABL，将纯化的PCR产物进行TA克隆，经菌落PCR筛选并测序鉴定后，提取重组质粒DNA，紫外分光光度计检测浓度换算成copies/mL浓度，稀释制备成质粒标准品，制作标准曲线观察灵敏度和线性范围，同时对质粒标准品的稳定性进行评估。初步应用该方法检测10例健康儿童和10例急性淋巴细胞白血病(ALL)初诊儿童的骨髓单个核细胞CRLF2水平。结果CRLF2 PCR产物具有单一特异的熔解曲线；标准品的线性检测范围为103～108copies/mL；质粒标准品反复冻融 3 次仍旧稳定；临床标本的 CRLF2 水平均在标准品线性检测范围。结论该实验室建立的 CRLF2 实时定量 PCR 检测方法具有良好的特异性、线性范围和稳定性，可应用于临床 ALL 儿童 CRLF2 基因的定量检测。

关键词:实时定量聚合酶链反应；急性淋巴细胞白血病；细胞因子受体样因子2；质粒标准品

尽管新化疗药物及联合化疗方案应用，使得儿童急性淋巴细胞白血病(ALL) 无事件生存率取得长足进步，但仍有 20% 患儿对化疗不敏感或因化疗过度导致复发或第二肿瘤发生。因此，寻找与预后相关的分子靶标进行分层治疗和疗效评估，将有益于进一步提高儿童 ALL 的治愈率[1]。……