革胡子鲶MHC基因表达qPCR分析的引物设计与评估

李转转，王 妍，高金伟，王晓梅,通信作者，陈成勋，李 涛，莫宝霖

（1. 天津农学院 水产学院，天津市水产生态及养殖重点实验室，天津 300384；2. 天津海友佳音生物科技股份有限公司，天津 300350；3. 天津农学院 基础科学学院，天津 300384）

革胡子鲶MHC基因表达qPCR分析的引物设计与评估

李转转1，王 妍2，高金伟1，王晓梅1,通信作者，陈成勋1，李 涛3，莫宝霖1

（1. 天津农学院 水产学院，天津市水产生态及养殖重点实验室，天津 300384；2. 天津海友佳音生物科技股份有限公司，天津 300350；3. 天津农学院 基础科学学院，天津 300384）

为应用实时荧光定量PCR（qPCR）技术分析革胡子鲶主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，MHC）基因的表达谱，本研究利用Primer 5软件设计扩增革胡子鲶MHC基因片段的引物并进行qPCR评估。结果显示：引物MHCF1-MHCR3在qPCR扩增时，融解曲线为单一尖锐峰；标准曲线分析显示：引物的扩增效率为99.3％，R2值为0.998。上述结果说明该对引物具有良好的扩增特异性和扩增效率，满足了qPCR扩增的要求。本研究为革胡子鲶MHCⅠ基因表达的qPCR分析奠定了基础。

革胡子鲶；主要组织相容性复合体；实时荧光定量PCR；融解曲线；扩增效率

主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，MHC）是由位于染色体上高度多态、紧密连锁的基因位点组成；在机体的特异性免疫中发挥重要作用的基因家族[1-2]。鱼类的MHC主要包括MHCⅠ和MHCⅡ两类分子，分别负责内源性和外源性抗原的加工和呈递，与疾病的抗性和易感性密切相关[3-4]。自从1990年Hashimoto等[5]报道鲤鱼MHCⅠ类和MHCⅡ的部分基因序列以来，数十种鱼类的MHC的基因序列、基因结构或基因表达谱得到了广泛研究[1-2,6-10]。……