副猪嗜血杆菌同一质粒携带blaROB-1和aacA-aphD耐药基因

杨守深 ， 孙 坚 ， 范克伟 ， 杨小燕 ， 廖晓萍

(1.龙岩学院生命科学学院， 福建 龙岩 364012； 2. 福建省家畜疫病防治与生物技术重点实验室， 福建 龙岩 364012； 3. 华南农业大学兽医学院， 广东 广州 510642)

副猪嗜血杆菌同一质粒携带blaROB-1和aacA-aphD耐药基因

杨守深1,2， 孙 坚3， 范克伟1,2， 杨小燕1,2， 廖晓萍3

(1.龙岩学院生命科学学院， 福建 龙岩 364012； 2. 福建省家畜疫病防治与生物技术重点实验室， 福建 龙岩 364012； 3. 华南农业大学兽医学院， 广东 广州 510642)

探讨1株副猪嗜血杆菌携带介导β-内酰胺类药物耐药基因blaROB-1耐药质粒的基因环境。抽提阳性菌的耐药质粒，采用电转法将耐药质粒转入DH5α，运用Southern blot确定耐药基因blaROB-1的位置，通过测序获得耐药质粒的基因组成结构。结果表明，该菌携带有2个质粒，其中1个质粒(pQY431-1)携带有耐药基因blaROB-1，该质粒成功转入受体菌DH5α，转化子较受体菌对阿莫西林、头孢克洛、庆大霉素、卡那霉素以及阿米卡星的MIC分别提高了64倍、16倍、 32倍、64倍和2倍。该质粒全长为7 777 bp，其基因环境由潜在的移动和复制区、一个截断的ISApl1插入序列、耐药基因aacA-aphD和blaROB-1组成。

副猪嗜血杆菌；抗菌药；耐药基因；基因环境

副猪嗜血杆菌 (Haemophilusparasuis, HPS) 属于革兰阴性菌，主要引起猪多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎, 又称格拉瑟病 (Glässer′s disease)。兽医临床上，β-内酰胺类抗生素常被用于治疗该病。本课题组对华南地区临床分离的145株副猪嗜血杆菌进行药物敏感性分析，并对β-内酰胺类药物耐药基因检测时，发现其中1株菌QY431携带有blaROB-1耐药基因，对部分β-内酰胺类药物产生耐药，如青霉素、头孢克洛，但是对头孢噻呋(<0.064 μg/mL) 和头孢噻肟(<0.064 μg/mL) 高度敏感；该菌还对氨基糖苷类药物庆大霉素产生耐药。因此，本文拟对该菌耐药基因环境进行研究，分析耐药基因的组成结构及其传播机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 TSA和TSB，购自OXOID公司；……