抗B型肉毒毒素治疗性胞内抗体的制备及活性研究

吉元刚，张国利，李泽鸿，岳玉环，吴广谋，田园，刘雨玲，李玉洁，赵鑫付玉和，王冬冬，张培培，侯天全，徐艳玲，马洪园

(1.吉林农业大学生命科学学院，长春 130118；2.军事医学科学院军事兽医研究所，长春130122)

抗B型肉毒毒素治疗性胞内抗体的制备及活性研究

吉元刚1,2，张国利2，李泽鸿1，岳玉环2，吴广谋2，田园2，刘雨玲2，李玉洁1，赵鑫1,2付玉和1,2，王冬冬2，张培培2，侯天全2，徐艳玲2，马洪园1,2

(1.吉林农业大学生命科学学院，长春 130118；2.军事医学科学院军事兽医研究所，长春130122)

以克隆表达的B型肉毒毒素轻链蛋白(BoNT/BL)为抗原，从噬菌体抗体库Tomlinson I+J筛选出得到活性高和特异性高的全人源单链抗体(ScFv)，结合能够携带外源蛋白有效通过生物膜的小片段跨膜肽(TAT)制备跨膜单链抗体(TAT-ScFv)。经PCR后酶切，克隆到原核表达载体(pET-28a-TAT)中，构建含有跨膜肽(TAT)的抗B型肉毒毒素胞内抗体融合蛋白，并在大肠杆菌中诱导表达，进行纯化工艺，对产物进行浓度纯度、亲和常数测定及生物活性研究。成功构建TAT-ScFv表达载体，融合蛋白相对分子量为32.7 kDa，主要以可溶形式表达，纯度也达到95%以上，胞内抗体中和B型肉毒毒素致病轻链得到TAT-ScFv的亲和常数为(1.133±0.273)×106L/mol，小鼠神经细胞乙酰胆碱定量测定实验证明胞内抗体具有较好的抗毒素活性。此结果为B型肉毒毒素治疗性胞内抗体的研制和肉毒中毒治疗奠定了基础。

跨膜肽(TAT)；重组蛋白；表达；蛋白纯化；亲和常数；乙酰胆碱

肉毒芽胞梭菌是一种革兰氏阳性菌，菌体形态不一，多数呈现直杆状或稍带弯曲[1]。肉毒毒素BoNT是由肉毒梭菌分泌的一类具有致死性毒性极强的神经毒素，在国际上被归为A类生物战剂[2]。……