旋光法用于硫酸庆大霉素化学浓度检测的方法学验证

曾 莉

（四川省乐山市长征药业股份有限公司，四川乐山 614006）

旋光法用于硫酸庆大霉素化学浓度检测的方法学验证

曾 莉

（四川省乐山市长征药业股份有限公司，四川乐山 614006）

由于旋光法测定浓度快速且准确的特性，因此在药品生产质量检验中的应用日益广泛。在硫酸庆大霉素提炼工序成品液的质量控制中，如何确保旋光法应用的切实可行，就需要从线性、重现性、回收率、温度、专属性五个方面对该方法进行验证。

旋光法；线性；重现性；回收率

旋光法是一种很早就出现并应用广泛地研究分子非对称性结构的光学方法。由于旋光法所用的仪器简单，操作方便快速，普遍适用于制药厂或医院药房对中间体的质量控制与快速分析。根据硫酸庆大霉素有旋光性的特点，在该药品提炼工序成品液的质量控制中，本文将从线性、重现性、回收率、温度、专属性五个方面对该方法进行验证，得出旋光法适用于硫酸庆大霉素提炼工序成品液化学浓度检测的结论。

1 旋光法的基本原理

1.1 旋光

普通光波是一种在各个方向上振动的射线，它们与光的传播方向垂直。如果令其通过一个尼科尔（Nicol）棱镜（平面偏振片），则只有那些振动方向和棱镜晶轴平行的射线才能通过。这种只在一特定面上振动的光叫做平面偏振光。一束平面偏振光可以看成是由两个振幅和速度相同而螺旋前进方向恰好相反的圆偏振成分叠加而成。一般规定，若螺旋前进方向是顺时针时，称为右旋偏振光；反之，若螺旋前进方向是逆时针时，称为左旋偏振光。由于硫酸庆大霉素结构中含有不对称的碳原子，具有左旋性质，故可以用旋光仪测定其浓度。

1.2 旋光度

将一束平面偏振光通过介质，若左右旋偏振光在某种介质中的折射率不同，则它们通过介质的速度将不相同，因而由叠加产生的平面偏振光的振动方向也会改变。平面偏振光振动方向的改变相当于原有的振动平面在通过介质后转了一个角度α，称为旋光度。在一定的波长和温度条件下，硫酸庆大霉素溶液浓度的高低与旋光度的大小成正比。

2 旋光法测定仪器、器具和药品

2.1 仪器

WZZ-2S数字式自动旋光仪（光源为GP20Na-1型钠光灯），编号L500275，上海精密科学仪器有限公司；PL203型电子分析天平（感量为0.1mg），编号1229050162，梅特勒—托利多仪器（上海）有限公司。

2.2 器具

100mL容量瓶；50mL容量瓶；烧杯。

2.3 硫酸双氢链霉素原粉药品

四川长征药业股份有限公司，批号SC－GM-20161001，生物效价610u/mg（湿品）。

3 旋光法试验操作及分析

3.1 旋光法测定操作步骤

将样品放至室温。打开WZZ-2S数字式自动旋光仪的电源开关，预热20min，再打开测量开关。将新鲜蒸馏水缓缓注入长1dm的旋光管，使无气泡存在，盖上擦干的玻璃片，旋上金属帽，用纱布擦干外部，放入样品槽中，盖上箱盖，校正零点，复测3次。打开箱盖，取出空白旋光管，将样品缓缓注入旋光管中，同上操作，测定样品旋光度，复测3次，用测得的旋光度查回归曲线表，即得硫酸庆大霉素的化学浓度。

3.2 线性范围试验

3.2.1 认可标准

相关系数R≥0.999 9。

3.2.2 试验步骤与结果

用硫酸庆大霉素原粉作为标准品，批号SC-GM-20161001，湿品效价610u/mg，精密称取适量置50mL容量瓶中，加纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀。配成1万u/mL、4万u/mL、7万u/mL、10万u/mL、13万u/mL、16万u/mL、19万u/mL的标准溶液，分别在旋光仪上测定旋光值，根据旋光值，作线性回归方程并计算相关系数。

3.2.2.1 称量

表1 试样称量 g

3.2.2.2 硫酸庆大霉素标准溶液理论浓度的计算

表2 硫酸庆大霉素标准溶液理论浓度

3.2.2.3 硫酸庆大霉素标准溶液旋光值的测定

表3 硫酸庆大霉素标准溶液旋光值

3.2.3 相关性

计算线性回归方程为Y=5 599.129 1X-60.641 7；相关系数R=0.999 996 11。

3.2.4 试验结果

试验结果表明硫酸庆大霉素在1万u/mL～19万u/mL范围内线性关系良好。

3.3 重现性试验

3.3.1 认可标准

相对标准偏差RSD≤1.0%

3.3.2 试验步骤与结果

取上述10万u/mL的硫酸庆大霉素溶液，在旋光仪上连续测5次，记录下5次所测的旋光值，带入3.2.3的线性回归方程计算出实测浓度。

表4 硫酸庆大霉素溶液实测浓度

3.3.3 相对标准偏差

计算5次平均浓度为100 881u/mL，相对标准偏差RSD为0.05%。

3.3.4 重现性结果

符合重现性试验要求。

3.4 回收率试验

3.4.1 认可标准

回收率≥99.0%。

3.4.2 试验步骤与标准

将3.2.2.3所测得的旋光值带入回归方程进行计算，得实测硫酸庆大霉素溶液浓度，与标准浓度相比计算回收率。

表5 硫酸庆大霉素溶液回收率

3.4.3 试验结果

试验结果表明回收率平均值为100.15%；相对标准偏差为0.51%。试验结果符合要求。

3.5 温度对溶液旋光度的影响

3.5.1 认可标准

相对标准偏差≤1.0%

3.5.2 试验步骤与结果

取3.2.2中的10万u/mL的硫酸庆大霉素溶液分别在15℃、20℃、25℃、30℃下测定旋光值并计算相对标准偏差：

表6

3.5.3 平均浓度

10万u/ml的硫酸庆大霉素溶液分别在15℃、20℃、25℃、30℃下测定旋光值经计算平均浓度100 864u/mL，相对标准偏差0.03%。

3.5.4 试验结论

试验证明用旋光法测定硫酸庆大霉素，温度在10～30℃内对测定结果基本无影响。

3.6 专属性试验

3.6.1 认可标准

相对标准偏差≤1.0%

3.6.2 试验步骤与结果

在硫酸庆大霉素提炼工序中，需要加入解吸氨解吸饱和树脂，并用稀硫酸调pH，因此在本试验中辅料以解吸氨和稀硫酸作为考察对象。取3.2.2中的10万u/mL的溶液20mL测定旋光值（样一），再加入1mL4.5%解吸氨溶液，并用6.0mol/L的硫酸溶液调节pH至4.8～5.5（样二），测定旋光值并计算浓度进行比较。

表7 试样旋光值及浓度对比

3.6.3

10万u/mL未加辅料的硫酸庆大霉素溶液浓度为100 892u/ mL；10万u/mL加了辅料并用6.0mol/L的硫酸溶液调节pH至5.4后的硫酸庆大霉素溶液浓度为100 892u/mL。两种溶液的相对标准偏差RSD为0。

4 旋光法试验结论及评价

试验结果表明，用旋光法测定硫酸庆大霉素提炼工序成品液化学浓度时，在线性、重现性、回收率、温度、专属性各方面都符合要求，由此认为旋光法测定硫酸庆大霉素提炼工序成品液化学浓度切实可行。

[1] 药品生产验证指南[M].北京：化学工业出版社，2003.

Validation of Method for Determination of Chemical Concentration of Gentamicin Sulfate by Polarimetry

Zeng Li

Due to the rapid and accurate determination of concentration by optical method，it is widely used in pharmaceutical production quality inspection.It is necessary to verify the method in terms of linearity，reproducibility，recovery rate，temperature and specif city in the quality control of the f nished product liquid in the process of gentamicin sulfate extraction and how to ensure the practicability of the application of polarimetry.

polarimetry；linearity；reproducibility；recovery rate

R927

A

1003-6490（2016）11-0088-02

2016-10-10

曾莉（1981—），女，四川乐山人，工程师，主要研究方向为药品检验、制药工艺。