RegⅣ在胃癌及胃非癌组织中的表达及意义

叶震世　高雅玲　巴亚斯古楞　任建林

【摘要】 目的 检测再生基因4（RegⅣ）在各种胃癌及胃非癌组织中的表达情况， 并探讨其可能临床意义。方法 运用免疫组织化学方法检测73例胃癌手术切除标本和90例胃癌及癌旁非癌组织芯片标本中RegⅣ蛋白的表达情况。结果 RegⅣ在胃黏膜肠化生杯状细胞呈强阳性染色。肠型胃癌、胃印戒细胞癌、粘液腺癌的癌细胞中呈频繁免疫反应性[分别为100.0%（3/3）、93.3%（14/15）和90.9%（10/11）]。RegⅣ的表达与胃癌的组织分型相关（P<0.05）， 与胃癌的侵袭参数（主要包括肿瘤浸润深度、是否转移及TNM分期等）无明显相关性（P>0.05）。RegⅣ在胃印戒细胞癌和粘液腺癌中的表达阳性率分别为40.0%（12/30）和43.3%（13/30）。结论 RegⅣ在胃黏膜肠化生杯状细胞、胃印戒细胞癌及粘液腺癌中显示频繁的免疫反应性， 提示RegⅣ可能参与胃腺癌的“肠”途径发生机制。

【关键词】 胃癌；再生基因4；免疫组化；组织芯片

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.05.016

胃癌是起源于胃上皮的恶性肿瘤， 是影响和威胁人类健康的重要疾病之一；胃癌的发生、发展受机体内、外环境等多种因素的影响， 一般经历萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生、腺癌的发展阶段。

再生基因家族是近期研究的热点之一， 是一群主要在消化系统发挥作用的小分子分泌蛋白， 它们在组织损伤、炎症及肿瘤的发生、发展过程中发挥多种功能[1]。2001年研究学者首先从炎症性肠病库中分离出再生基因4（regenerating islet-derived family member 4， RegⅣ）， 其选择性表达于胃肠道上皮细胞和胰腺组织， 可能与组织炎症和肿瘤的发生有关[2]。L等[3]发现RegⅣ在结直肠腺瘤的分化起始中扮演重要角色。Li等[4]推测RegⅣ的过表达可能是结直肠癌的早期事件， 且与MUC2和EGFR的磷酸化正相关。因此， 探讨RegⅣ的表达情况及介导的信号通路可能是攻克人类胃肠道腺癌的有效措施之一。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 收集2007年6月～2009年6月厦门大学附属中山医院普外科胃癌切除术后组织蜡块标本共73例， 其中男58例， 女15例， 年龄28～84岁， 中位年龄59岁。所有标本按Lauren分型划分：肠型胃癌31例， 弥漫型胃癌42例；按WHO组织病理分型划分：管状腺癌23例， 乳头状腺癌3例， 低分化腺癌15例， 印戒细胞癌15例， 粘液腺癌11例， 类癌6例；按TNM分期划分：Ⅰ期4例、Ⅱ期13例、Ⅲ期32例、Ⅳ期24例。所有病例均经病理证实， 且术前均未经过放、化疗和免疫治疗。

另90例胃癌组织芯片（每例含平均直径2 mm的2个组织芯， 分别为癌灶及癌旁非癌组织）， 由上海芯超生物科技有限公司合成， 各组织类型均经病理证实， 未予放、化疗等特殊治疗。

1. 2 免疫组织化学染色方法 本院标本经常规固定脱水、石蜡包埋、连续切片；组织芯片由上海芯超生物科技有限公司合成。RegⅣ抗体（SANTA CRUZ公司）工作浓度按1∶30稀释， 突触素（Synaptophysin， Syn）和嗜铬粒蛋白A（Chromogranin A， CgA）抗体均为即用型抗体。EDTA修复液及柠檬酸修复液分别修复RegⅣ抗原和Syn、CgA抗原。滴加3% H2O2， 后滴加即用型非免疫正常山羊血清。滴加稀释后的RegⅣ抗体及Syn、CgA抗体， 置于4℃冰箱孵育过夜。最后与显色试剂盒反应， 出现棕褐色颗粒为阳性反应。实验中均设阴、阳性对照及石蜡切片苏木精-伊红（HE）染色。

1. 3 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件进行统计分析。WHO组织分型和Laurens分型间比较分别用Kruskal-Wallis H 检验和Mann-whitney U 检验， 检验水准α= 0.05；不同临床病理学特征间阳性率采用χ2检验、Fisher确切概率法或Spearman等级相关分析法。P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 胃癌与胃非癌组织中RegⅣ的表达 RegⅣ在肠型胃癌（杯状细胞可见图1）、粘液腺癌、胃印戒细胞癌的癌细胞中呈频繁的胞浆染色阳性[分别为100.0%（3/3）、90.9%（10/11）和93.3%（14/15）]。6例胃神经内分泌癌无一例见RegⅣ表达。而RegⅣ在胃黏膜肠化生上皮细胞呈稳定的胞浆染色强阳性（阳性率100%）。

图1 RegⅣ在肠型胃腺癌中的表达

注：A：RegⅣ在胃中分化管状腺癌的癌细胞中呈强阳性表达（×200）； B：为对照（HE染色， ×200）

2. 2 不同胃癌组织分型中RegⅣ的表达 相对于乳头状、管状腺癌， RegⅣ在弥漫浸润型胃癌（粘液腺癌、印戒细胞癌）中显示更频繁的免疫反应性， 提示RegⅣ的表达与胃癌的组织分型相关（P<0.05）。但通过对比胃癌的侵袭、浸润参数等数据， 发现RegⅣ的表达与胃癌的浸润深度、转移及TNM分期无明显相关性（P>0.05）。

2. 3 胃黏膜组织芯片中RegⅣ的表达 所有癌旁胃黏膜肠化生杯状细胞均显示RegⅣ强阳性表达（阳性率100%）（见图2A、B）， RegⅣ在胃印戒细胞癌和胃粘液腺癌中的表达阳性率分别为40.0%（12/30）和43.3%（13/30）（见图2C、D）， 30例胃管状腺癌无一例出现RegⅣ表达（无一例可见杯状细胞， 阳性率0）。

图2 RegⅣ在胃癌组织芯片的表达

注：A， B：癌旁萎缩性胃炎：重度肠化生上皮细胞呈RegⅣ强阳性表达（×50， ×100）；C， D：胃粘液腺癌：癌细胞呈RegⅣ阳性表达（×50， ×100）；G， H：（×400）

3 讨论

本次研究中， RegⅣ在胃癌前病变（肠上皮化生、不典型增生）呈稳定的强阳性表达， 而在胃上皮细胞的恶性转化（粘液腺癌、印戒细胞癌）表达有所减弱；结合其他学者发现在胃、结肠腺瘤中RegⅣ的表达上调， 推测RegⅣ可能为胃肠道癌前病变及腺瘤的良好生物学标志物。在3例可见杯状细胞的高至中分化肠型胃腺癌中， 其癌细胞均呈RegⅣ阳性表达；杯状细胞未见的肠型胃腺癌中无一例呈RegⅣ阳性表达；结合来源肠粘蛋白表型的胃腺癌与异位表达的CDX2有关， 及CDX2通过与RegⅣ基因的5端直接作用而启动RegIV的转录[5]， 可以推测RegⅣ与胃腺癌的肠表型密切相关。虽然其作用机制至今未明， 相关学者总结RegⅣ可能作为一种生长因子、抗凋亡因子而参与调节消化系统肿瘤细胞的增殖与分化[6]。

研究显示RegⅣ在不同分化类型的胃腺癌中的表达差异显著：RegⅣ在粘液腺癌、印戒细胞癌等低分化腺癌中的表达阳性率明显高于中至高分化的肠型胃腺癌， RegⅣ的表达与胃癌的分化程度有关。肠上皮化生向杯状不典型增生的转化与印戒细胞癌的发生关系密切， 作者发现RegⅣ在这些组织细胞中呈频繁的胞浆染色阳性， 故推测RegⅣ蛋白可能是一种粘液分泌性癌瘤的良好生物学标志物。

在本次免疫组织化学染色研究中， 通过探讨RegⅣ在各种胃癌、胃非癌组织中的表达情况及规律， 作者发现RegⅣ频繁表达于胃黏膜肠化生上皮、肠型胃腺癌（杯状细胞可见）及低分化腺癌中（虽然经历先上调后轻微下调的变化趋势）， 从而推测RegⅣ可能通过“肠”途径参与胃腺癌的发生机制， 其可能成为胃肠道癌前病变和粘液性癌瘤的良好生物学标志物。因此， 进一步探讨RegⅣ所介导的胃肠道肿瘤发生、发展的具体机制将为肿瘤的诊断和治疗带来重大而深远的意义。

参考文献

[1] Zhang YW， Ding LS， Lai MD. Reg gene family and human diseases. World J Gastroenterol， 2003， 9（12）：2635-2641.

[2] Hartupee JC， Zhang H， Bonaldo MF， et al. Isolation and characterization of a cDNA encoding a novel member of the human regenerating protein family： RegⅣ. Biochim Biophys Acta， 2001， 1518（3）：287-293.

[3] L B， Xu J， Zhu Y， et al. Systemic analysis of the differential gene expression profile in a colonic adenoma-normal SSH library. Clin Chim Acta， 2007， 378（1-2）：42-47.

[4] Li XH， Zheng Y， Zheng HC， et al. REGⅣ overexpression in an early stage of colorectal carcinogenesis： an immunohistochemical study. Histol Histopathol， 2010， 25（4）：473-484.

[5] Naito Y， Oue N， Hinoi T， et al. RegⅣ is a direct target of intestinal transcriptional factor CDX2 in gastric cancer. PLoS ONE， 2012， 7（11）：e47545.

[6] Numata M， Oshima T. Significance of regenerating islet-derived typeⅣ gene expression in gastroenterological cancers. World J Gastroenterol， 2012， 18（27）：3502-3510.

[收稿日期：2015-10-23]