肺癌胸腔积液液基细胞学与沉渣包埋的对比研究

魏丽

【摘要】 目的 探讨胸水细胞诊断和离心沉渣病理诊断的差异及免疫组化标记在胸水离心沉渣中应用及意义。方法 122例原发性肺癌的胸腔积液的液基细胞片及其沉渣包埋HE、免疫组化切片， 行HE染色、镜下观察， 液基细胞片及沉渣包埋HE切片阳性的病例， 进行包埋沉渣的免疫组化标记检测。结果 122例原发性肺癌的胸腔积液， 液基细胞学阳性率为44.3%（54/122）；沉渣包埋HE及免疫组化联合应用证实明确46例发现癌细胞， 明确分型41例为转移性腺癌， 3例为转移性小细胞癌， 2例为转移性鳞癌， 阳性率为37.7%；液基细胞学的阳性病例中， 有10例为增生的间皮细胞， 阴性病例中又有2例明确发现癌细胞。结论 原发性肺癌胸水液基细胞学检查较沉渣包埋假阴性高， 漏诊比率高， 沉渣包埋假阴性率低， 漏诊及误诊减少， 并且明确肿瘤类型， 为临床治疗提供确切依据， 尤其是肺癌类型不定， 通过胸水沉渣包埋就能明确肿瘤类型， 避免患者通过穿刺活检来明确类型而引起的痛苦及并发症。

【关键词】 原发性肺癌；胸水；胸腔积液；沉渣包埋

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.05.018

胸腔积液是多种肺部疾病的常见并发症， 也是验证病因、诊断其良恶性的重要手段。细胞病理学是其重要的诊断方法， 但胸水细胞形态与原发灶不同， 易造成假阴性、假阳性， 而导致延诊、误诊、误治。因此要寻求有效的提高肺癌的诊断阳性率的有效手段， 提高肺癌患者存活率及治愈率。现收集本院2013～2015年肺癌的胸腔积液的液基细胞片及离心沉渣细胞片， 探讨胸水细胞诊断和离心沉渣的病理诊断的差异及免疫组化标记在胸水离心沉渣中应用及意义。现报告如下。

1 材料与方法

1. 1 材料 收集郑州市第三人民医院病理科2013～2015年共计122例原发性肺癌的胸腔积液的液基细胞片及其沉渣包埋HE、免疫组化切片。

1. 2 方法

1. 2. 1 胸水液基细胞制片 取胸水15 ml于试管， 3000 r/min， 离心5 min， 弃上清液， 取沉渣放于非妇科液基保存液中， 进行液基细胞学的自然沉降制片， 95%乙醇固定， HE染色， 光镜观察。

1. 2. 2 沉渣包埋 取胸水100 ml， 再加入0.5 ml冰醋酸， 静置5 min， 3000 r/min， 离心5 min， 弃上清液， 加入95%的酒精静置20 min， 弃酒精， 取沉渣用滤纸包裹， 用中性福尔马林固定， 常规脱水、石蜡包埋、切片， HE染色， 光镜观察。

1. 2. 3 免疫组化检测 石蜡切片厚4～5 μm， 采用SP法操作按试剂盒说明书进行， 每组均设阳性对照片。所选一抗CK7、NapsinA、TTF-1、Syn、CR、WT-1、CD163、P63及P40（试剂及试剂盒均购自福建迈新生物技术开发公司）， 复染、脱水、透明、封片。

1. 2. 4 免疫组织化学结果的判定 TTF-1、P40、WT-1及P63以细胞核着棕黄色为阳性， NapsinA、Syn、CR和CK7以胞质着棕黄色为（+）。

2 结果

2. 1 胸水液基细胞学结果 122例原发性肺癌的胸腔积液， 液基细胞学观察68例未见癌细胞， 31例发现异型细胞不能排除癌， 23例发现癌细胞， 阳性检出率为44.3%。细胞形态学转移性腺癌：瘤细胞单个或成群排列， 成群细胞互相重叠， 呈桑葚状， 许多细胞胞浆空泡、偶尔为较大的空泡， 核常折叠或呈锯齿状 ， 核膜明显， 染色质呈颗粒状、常有核仁。分化差的瘤细胞， 异型性更大， 核分裂象增多、排列较松散、较少重叠；转移性鳞癌细胞：细胞形态大小不一， 形态学特征不典型；转移性小细胞癌：细胞形态小， 排列密集成团、呈葡萄状， 胞浆少， 浆内无空泡， 多呈裸核， 核染色粗、未见核仁。

2. 2 沉渣包埋 HE染色 切片中细胞更丰富， 细胞排列在同一平面上， 染色清晰， 排列方式与细胞学相似， 但细胞立体感不如细胞制片。

2. 3 免疫组化结果 沉渣包埋HE及免疫组化联合应用观察76例未见癌细胞， 46例见癌细胞， 其中41例为转移性腺癌， 3例为转移性小细胞癌， 2例为转移性鳞癌， 阳性检出率为37.7%， 其中胸水中转移性肺腺癌TTF-1、CK7及NapsinA（+）；转移性鳞状细胞癌P63及P40（+）；转移性小细胞癌Syn（+）。与液基细胞学的阳性病例比较， 发现有10例细胞学阳性病例为增生的间皮细胞， 细胞学阴性病例中又有2例明确发现癌细胞。沉渣包埋免疫组化结果与组织病理免疫组化结果一致。

3 讨论

肺癌胸腔积液中癌细胞失去了原来组织及器官结构的束缚而自由漂浮、增生繁衍， 失去了原来组织形态， 与原发灶不同， 因此单靠细胞形态来判断良恶性诊断， 敏感性较低， 尤其早期癌细胞异型性不太明显的时候， 需要与反应性的间皮细胞鉴别， 单靠细胞学来明确诊断易造成假阴性， 而误诊、延诊、误治， 需免疫组织化学进一步明确诊断。

常规细胞学涂片简捷方便、快速经济， 但是涂片厚薄不均、细胞重叠、结构欠清晰， 再加上血性及炎细胞背景， 给诊断带来干扰， 易造成假阴性。液基细胞学虽较传统细胞涂片除去了血性背景， 细胞平铺、薄， 但炎细胞是无法除去的， 阳性检出率降低。本研究也证实了细胞沉渣包埋所有细胞排列在同一平面， 细胞结构清晰、背景清楚， 再联合应用免疫组化可明确诊断、明确分型， 阳性检出率提高， 假阴性比率也降低， 也为鉴别诊断提供了重要依据[1， 2]。尤其是肺癌中以胸水为首发症状时， 肺癌类型不明确， 可以通过胸水沉渣包埋及免疫组化明确肿瘤类型， 减少了患者穿刺活检的痛苦， 并且为患者的后期治疗及临床分期提供了确切的依据。

总之， 胸水的液基细胞学和沉渣包埋的联合使用将有利于明确诊断， 且明确肿瘤分型， 癌细胞阳性检出率提高， 假阴性比率也降低， 避免误诊、延诊、误治， 为提高患者治愈率提供了有效的手段， 也为减少患者的痛苦提供了新的诊断手段。

参考文献

[1] 陈学敬， 周立娟 ， 曲杨， 等.沉渣包埋联合免疫组化在胸水转移性肺腺癌与胸膜恶性间皮瘤鉴别诊断中的应用.诊断病理学， 2014， 21（5）：263-266.

[2] Lozano MD， Panizo A， Toledo GR， et al. Immunocytochemistry in the differential diagnosis of serous effusions： a comparative evaluation of eight monoclonal antibodies in Papanicolaou stained smears. Cancer， 2001， 93（1）：68-72.

[收稿日期：2015-09-29]