蛋白激酶C-δ特异性脱氧核酶对HepG2细胞生长的影响



蛋白激酶C-δ特异性脱氧核酶对HepG2细胞生长的影响

魏卓1，罗速2*

(1.吉林省人民医院，吉林 长春130021；2.北华大学基础医学院，吉林 吉林132013)

蛋白激酶C(PKC)存在于细胞浆内，是一类由钙激活的磷脂依赖性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，与神经传导、肿瘤生长及细胞生长、分化和凋亡等生理病理过程密切相关。依据对二酰基甘油(DAG)和Ca2+的依赖不同，PKC可以分为传统型(cPKC)、新型PKC(nPKC)和非典型PKC(aPKC)[1-3]三类。蛋白激酶C-δ(PKC-δ)属于nPKC，其激活物是DAG而并非是Ca2+；PKC-δ被激活后可转移至线粒体或细胞膜上，活化并切割半胱天冬酶3(caspase-3)后释放出活性片段，进而使多种底物蛋白磷酸化，使其活化或者失活从而引起细胞凋亡[3-8]。PKC-δ对细胞凋亡的调控具有促凋亡和抗凋亡的双重性。因此，PKC-δ的异常表达或者激活与多种生命现象密切相关，尤其是对肿瘤细胞的凋亡有着非常重要的意义[9]。

脱氧核酶(deoxyribozymes,DRz)是一种新型的基因治疗方法，尤其是10-23型DNAzyme，几乎可以特异性地结合任何靶向RNA[10]，切割位点序列要求非常简单，即嘌呤-嘧啶结构，性质稳定[11-16]。10-23型脱氧核酶结构包括底物结合臂和催化序列两部分，其活性中心由15个脱氧核糖核酸组成，活性中心两侧各有约7-9个核苷酸的底物结合臂，底物结合臂通过Watson2 Crick配对与底物结合后进行底物的定点切割[17-20]。实验设计了针对PKC-δ mRNA的10-23DNAzyme，并对其两端进行硫代化修饰，利用RT-PCR方法扩增PKC-δ的cDNA片段后，将其克隆到pcDNA3.1(+)构建重组质粒，筛选阳性重组质粒后使用T7 RNA聚合酶体外转录获得PKC-δ mRNA表达载体，MTT法检测DRz,DRz-s,和asON 对HepG2.2.15 细胞的生长影响。

1材料与方法

1.1材料