正交试验法优选飞机草地上部分总黄酮提取工艺研究

黄吉生，孙君鑫，郭艺，王勇，杨卫丽

(海南医学院药学院，海南 海口 571199)

正交试验法优选飞机草地上部分总黄酮提取工艺研究

黄吉生，孙君鑫，郭艺，王勇，杨卫丽

(海南医学院药学院，海南 海口 571199)

目的 优选飞机草地上部分总黄酮的提取工艺。方法以飞机草地上部分总黄酮含量为考察指标，采用正交试验，以乙醇浓度、提取时间、料液比和提取次数为考察因素，优化飞机草中总黄酮的提取工艺。结果芦丁对照品的浓度与吸光度在8.8～30.8µg/ml范围内线性良好(r=1)。提取工艺为70%乙醇溶液提取，料液比1:70，超声提取2次，每次50 min。结论该提取工艺合理，方法简便，可为飞机草中总黄酮提取工艺的确定提供实验依据。

飞机草；总黄酮；提取工艺

飞机草(Chromolaena odorata L.)为菊科泽兰属植物，主产华南、西南等地，是我国民间中草药，性温，味微酸，具有散瘀消肿，解毒和止血功效，主要用于跌打肿痛、疮疡肿毒、皮炎和外伤出血[1]。药理学研究表明飞机草叶的提取物具有抗糖尿病、抗白内障以及促进伤口愈合的作用[2-3]。黄酮类化合物对多种肿瘤具有预防、治疗或化疗增敏作用[4-5]；还具有降血糖、降血脂、降压、镇痛和抗炎[6]。故本文采用正交试验法，以总黄酮为考察指标，研究飞机草中总黄酮的提取工艺，为该药材的开发提供科学依据和参考。

1 材料与仪器

1.1 材料 飞机草地上部分采于海南省海口市秀英区，经鉴定为菊科泽兰属植物飞机草的干燥地上部分；芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号：100080-200707，纯度：92.5%)；三氯化铝、无水乙醇均为分析纯。

1.2 仪器 UV-1800PC紫外可见分光光度计(上海凤凰光学科仪有限公司)；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；AL104电子天平(梅特勒-托利多(上海)仪器公司)；XS Dualrange分析天平(梅特勒-托利多仪器公司)；SY-180型超声波清洗器(上海宁商超声波仪器有限公司)；HC-150TZ型高速多功能粉碎机(永康市绿可食品机械有限公司)； GZX-9240ME型数显鼓风干燥箱(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称得芦丁对照品11.00 mg，置50 ml容量瓶中，70%乙醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，得0.220 mg/ml的对照品溶液。

2.2 标准曲线的制作 精密吸取芦丁对照品溶液0.0 ml、1.0 ml、1.5 ml、2.0 ml、2.5 ml、3.0 ml、3.5 ml于25 ml容量瓶中，各加入5%AlCl3乙醇溶液1.5 ml，混匀，70%乙醇溶液定容，放置10 min，在波长405 nm处测定吸光度值。以吸光度A为纵坐标，芦丁浓度C(µg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=0.0254X+ 0.0399，R2=1(n=6)，线性范围为8.8～30.8µg/ml。

2.3 提取方法预实验 进行正交试验之前，采用单因素试验对提取方法、乙醇浓度、超声提取时间等因素进行了初步考察，见表1、图1及图2。由结果可知超声波提取优于浸提，所以初步确定了超声波提取为方法，以乙醇浓度(50%、60%、70%)，超声提取时间(30 min、40 min、50 min)等进行正交试验。

表1 飞机草中总黄酮提取方法考察

图1 乙醇浓度的单因素结果

图2 提取时间的单因素结果

2.4 正交试验优选 在预实验基础上，取飞机草药材粉末1.0 g，精密称定，以总黄酮含量为指标，对乙醇浓度、提取时间、料液比和提取次数进行正交试验，每个因素选择3个水平，按L934正交设计进行试验。因素水平见表2，L934正交试验设计见表3。由表3的极差分析结果可以看出，RA＞RC＞RD＞RB，4个因素对飞机草中总黄酮提取率的影响大小依次为：乙醇浓度(A)＞提取时间(C)＞提取次数(D)＞料液比(B)。四因素中，乙醇浓度的提取作用最为显著，料液比提取作用较不显著。在试验设计范围内，优化飞机草中总黄酮的最佳条件为A3B3C3D2即乙醇体积分数70%、料液比1:70、提取时间50 min、提取2次。

表2 飞机草中总黄酮提取工艺因素水平表

2.5 结果 为确定该工艺的稳定性与优劣，在上述正交试验的基础上，按照飞机草中总黄酮的最佳提取工艺，进行重复验证实验。精密称取适量的飞机草，按正交试验优化的最佳工艺条件提取，即乙醇体积分数70%、料液比1:70、提取时间50 min、提取2次，测定含量，见表4。由A3B3C3D2工艺条件提取的飞机草总黄酮含量平均为1.13%，高于其他条件提取所得的总黄酮含量，故证明正交试验优选的A3B3C3D2为最佳提取工艺。

表3 飞机草中总黄酮提取工艺正交表L934试验安排和结果

表4 验证实验结果

3 讨论

从直观分析结果可知，序号7的结果与最佳提取工艺A3B3C3D2所测得的结果相近，如进行工业生产或大规模提取，从节约成本的角度考虑可采用A3B1C3D2的工艺条件组合，即为乙醇浓度70%、料液比1:50、提取时间50 min、提取2次。

随着科学技术的发展，超声技术已应用于提取植物中生物碱、黄酮类、多糖类、皂苷类等成分[7]，成为天然产物提取研究的一个常用方法[8]。本试验首先采用单因素试验考察了提取方法，结果超声波提取操作简便、提取率较高，故选择超声波方法进行提取。

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Optimal extraction process of total flavonoids in the aerial parts of Chromolaena odorata L.by orthogonal experiment.

HUANG Ji-sheng,SUN Jun-xin,GUO Yi,WANG Yong,YANG Wei-li.School of Pharmacy,Hainan Medical University,Haikou 571199,Hainan,CHINA

ObjectiveTo optimize the extraction process of total flavonoids in the aerial parts of Chromolaena odorata L..MethodsThe content of total flavonoids was observed to evaluate the extraction technology.Parameters affecting the extraction percentage of total flavonoids were ethanol concentration,the extraction times,the solid-liquid ratio,time of ultrasonic extraction by orthogonal experiment.ResultsThe standard curve was linear in the concentration ranges of 8.8～30.8µg/ml(r=1).The best extraction condition of total flavonoids was extracting 2 times,50 min each time,with 70%ethanol as the solvent and solid to liquid ratio of 1:70.ConclusionIt is proved that the method is reasonable and simple,which can provide a reference for the extraction of Chromolaena odorata L..

Chromolaena odorata L.;Total flavonoids;Extraction process

R93

A

1003—6350（2016）04—0524—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.04.003

2015-10-23)

海南省教育厅高等学校科学研究资助项目(编号：Hjkj2013-35)；海南省级大学生创新创业训练计划项目(编号：20140105)；海南医学院药学院创新实验计划项目(编号：hyydc2013007)

杨卫丽。 E-mail:weili-yang@126.com