王不留行种子的ITS2序列分子鉴定研究＊

马双姣，周建国，金 钺，赵菊润，姚 辉＊＊

（1.中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所 北京 100193；2. 云南龙陵县石斛研究所 保山 678300）

王不留行种子的ITS2序列分子鉴定研究＊

马双姣1，周建国1，金 钺1，赵菊润2，姚 辉1＊＊

（1.中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所 北京 100193；2. 云南龙陵县石斛研究所 保山 678300）

目的：基于ITS2 序列对中药材王不留行种子及其混伪品进行鉴定研究，为王不留行种子及其混伪品的鉴定提供新方法。方法：对王不留行种子及其混伪品样品提取基因组DNA、PCR扩增、双向测序获得ITS2序列。应用MEGA 6.0软件计算种内、种间遗传距离，构建邻接树，基于自行编写的代码和开源代码 PHP QR Code 的编码方式，将王不留行及其混伪品 ITS2序列转换为条形码图片，获得各物种二维DNA 条形码图片，并在中药材DNA条形码鉴定系统（www.tcmbarcode.cn）对所获得ITS2序列进行分析鉴定。结果：王不留行药材ITS2序列长度为219-221 bp，种内最大 K2P 遗传距离为0.009，小于其与混伪品的种间K2P遗传距离，王不留行及其混伪品ITS2序列间存在的变异位点较多。NJ树结果表明王不留行与其混伪品分别聚为一支，可明显区分。结论：ITS2序列可以准确鉴别王不留行种子，为其种质资源鉴定和中药材种子质量标准的建立提供了新方法，将获得的ITS2序列转换为二维DNA条形码可为王不留行药材流通管理提供便利，为保障王不留行临床用药安全提供了新的技术手段。

王不留行 种子 ITS2鉴定 DNA 条形码 混伪品

王不留行为石竹科植物麦蓝菜Vaccaria segetalis （Neck.） Garcke的干燥成熟种子，又名不留行、禁宫花、剪金花和麦蓝子等[1]。……