拟南芥总RNA的提取及RT—PCR扩增CBF1基因

熊结标

摘 要：CBF1基因的扩增是研究植物抗旱基因的前期工作。本研究用Trizol试剂法提取模式植物拟南芥叶片的总RNA，经过反转录进行PCR扩增，将产物DNA回收后，连接PCR片段与T载体，电击转化入E. coli大肠杆菌感受态细胞；涂平板长出菌落，挑取半个白斑菌落电泳鉴定转化子；鉴定完成后提取质粒，用双酶切法进行鉴定，结果表明获得CBF1基因。

关键词：拟南芥 RNA 抗旱基因 CBF1

拟南芥（Arabidopsis thaliana）：十字花科，两年生草本，高7厘米～40厘米，广泛用于植物遗传学、发育生物学等研究，已成为一种典型的模式植物。其原因主要基于该植物具有以下特点：植株个体小（1平方厘米可种植好几棵）、生长周期快（从发芽到开花不超过6周）、种子多（每株每代可产生数千粒种子）、生命力强（用普通培养基就可作人工培养），其基因组是目前已知植物基因组中最小的；同时，拟南芥属于自花授粉植物，基因高度纯合，用理化因素处理突变率很高，容易获得各种代谢功能缺陷型的植株。因此，其被科学家誉为“植物中的果蝇”。

1. CBF基因功能及特性

CBF转录激活因子是一类受低温特异诱导的反式作用因子，它们能与CRT/DRE（C-repeat/dehydration-responsive element）DNA调控元件特异结合，促进启动子中含有这一调控元件的多个冷诱导和脱水诱导基因的表达，从而激活植物体内的多种耐逆机制。拟南芥CBF1转录激活因子能调控一组抗干旱、抗低温基因的表达，更有效地提高植物抗干旱、抗低温的能力。对冷驯化过程中基因表达差异的认识，使抗冻基因（COR）的克隆及其功能的分析成为研究冷驯化过程的主要目标，在拟南芥和其他抗冻植物中分离出许多COR基因，这些基因对植物抗冻有非常重要的作用。……