大蒜叶凝集素基因ASAL的克隆与表达载体的构建

陈德西，何忠全，向运佳，胡荣平

(四川省农业科学院植物保护研究所，农业部西南作物有害生物综合治理重点实验室，四川 成都 610066)

大蒜叶凝集素基因ASAL的克隆与表达载体的构建

陈德西，何忠全*，向运佳，胡荣平

(四川省农业科学院植物保护研究所，农业部西南作物有害生物综合治理重点实验室，四川 成都 610066)

大蒜叶凝集素基因(Alliumsativumleaf agglutinin,ASAL)是一种高活性的凝集素基因，且具显著的抗虫性。克隆大蒜ASAL基因将为其在转基因作物中抗虫特性研究奠定基础。本文以GenBank 公布的ASAL基因序列设计特异引物，采用 RT-PCR 法从当地大蒜品种二水早和新都软叶的幼苗中克隆ASAL基因。结果表明，克隆的两个ASAL基因与已知基因的碱基序列相似性分别为98.7 % 和98.9 %，氨基酸序列相似性为98.3 %。将其亚克隆至表达载体中，经菌落 PCR 和酶切鉴定，成功构建了重组质粒。将该载体导入农杆菌EHA5ɑ进行保存。

ASAL基因；刺吸式害虫；基因克隆；表达载体；构建

植物凝集素是来源于植物的一类能凝集细胞和沉淀单糖或多糖复合物的非免疫来源的非酶蛋白质。其研究始1888年，距今已有120多年的历史。1982年Hoffman等[1]克隆出了第一个凝集素基因为菜豆凝集素基因(pha)，目前已经分离出多种如豌豆凝集素 (Pea lectin,PL)、雪花莲凝集素 (Galanthus nivalis agglutinin,GNA)、麦胚凝集素 (Wheat germ agglutinin,WGA)、半夏凝集素 (Pinellia ternata agglutinin，PTA) 等植物外源凝集素基因[2]。由于植物凝集素对于单糖或糖复合物特异性结合的能力，在信号转导、免疫反应、植物防御等诸多信号过程中均具有重要作用；同时也具有细胞凝集、抗病毒、抗真菌及诱导细胞凋亡或自噬等多种能力，因此在生命科学、医学及农业等诸多方面有较好的研究价值和应用前景。……