柴胡皂苷对抑郁模型大鼠海马神经元的保护作用*

蔡珍珍徐广有董海影温秋婷于秀文王绍清张晓杰张静艳



柴胡皂苷对抑郁模型大鼠海马神经元的保护作用*

蔡珍珍①徐广有①董海影①温秋婷①于秀文①王绍清①张晓杰①张静艳①

【摘要】目的：探讨柴胡皂苷对抑郁模型大鼠行为及海马神经元细胞凋亡的保护作用。方法：采用随机数字表法将60只SD雄性大鼠分为对照组、模型组、氟西汀组和柴胡皂苷组，每组15只。采用慢性不可预见性应激刺激（CUMS）加孤养方式复制抑郁模型。于造模第2天开始，对氟西汀组和柴胡皂苷组大鼠进行灌胃给药。在实验的第1、7、14、21天，通过糖水消耗量实验检测大鼠行为学改变。采用RT-PCR法对各组大鼠脑海马神经元JNK、Bad mRNA进行定量分析。结果：对照组、柴胡皂苷组、氟西汀组第14及21天糖水偏爱度均高于模型组，JNK、Bad mRNA表达量均低于模型组，比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论：柴胡皂苷可以有效控制大鼠抑郁症状，其机制可能与降低海马组织中JNK、Bad蛋白表达有关。

【关键词】柴胡皂苷； 海马； 抑郁； 凋亡信号调节激酶1

①齐齐哈尔医学院 黑龙江 齐齐哈尔 161006

First-author’s address：Qiqihar Medical College，Qiqihar 161006，China

抑郁症的发病机制目前有多种假说，有观点认为抑郁易损基因与心理应激的共同作用，导致的氧化应激、神经元凋亡与抑郁症的发生密切相关[1]。基于寻找抗抑郁作用的靶治疗点，科学界开展了大量的研究，并取得一定的进展[2-3]。柴胡皂苷是柴胡的主要成分，具有解郁醒脑、改善抑郁样症状的作用，但机制尚不明确。本实验从柴胡皂苷抗凋亡、缓解神经元损伤角度探讨其抗抑郁作用机制，现具体报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 2～3月龄清洁级雄性健康SD大鼠60只，体重180～200 g，由大连医科大学动物实验中心提供，许可证号：SCXK（辽）2008-0002。采用随机数字表法将其分为正常对照组、模型组、氟西汀组和柴胡皂苷组共四组，每组15只。

1.2 药品及试剂 柴胡皂苷（南京泽朗医药科技有限公司提供，批号：ZL043583DY），盐酸氟西汀胶囊（苏州俞氏药业有限公司。批号：H20093454），PCR试剂盒、反转录试剂盒由宝生物工程有限公司提供。

1.3 仪器 PCR System扩增仪2700为Applied Biosystems公司产品，荧光定量PCR仪ABI7300为ABI公司产品。

1.4 方法

1.4.1 造模及给药 对照组不给予任何刺激。其余各组大鼠均分笼饲养并进行21 d慢性不可预见性应激（CUMS）刺激，方法根据Katz法进行改进[4]。于造模第2天开始氟西汀组采用氟西汀1.2 mg/（kg·d），柴胡皂苷组采用柴胡皂苷25 mg/（kg·d）进行灌胃给药，对照组及模型组给予等量生理盐水。

1.4.2 大鼠行为学评价 在实验的第1、7、14、21天测定1 h大鼠饮用1％蔗糖水及纯水量，计算大鼠糖水偏爱度（糖水偏爱度＝糖水消耗量/总液体消耗量×100％）。

1.4.3 RT-PCR法检测JNK、Bad的mRNA含量 分离海马，按RNAiso Reagent试剂盒操作流程提取海马组织总RNA并测验RNA纯度及浓度。按照SYBR Premix Ex Taq（Perfect Real Time）kit试剂盒说明进行实验，反应体系为25 μL。反应引物：JNK-F1：5’-CTGTGCTAATGACCTGCTTGTTG-3’，JNK-R1：5’-TACCCGAGAGTTTGGGCTGT-3’，Bad-F1：5’-AGACACCTGAGCTGACCTTGGAG-3’，Bad-R1：5’-GTTGAAGTTGCCATCAGCAAACA-3’，按下列公式计算△△Ct值：△CT（test）＝CT（target，test）-CT（ref，test），△CT（calibritor）＝CT（target，cal）-CT（ref，cal），△△CT＝△CT（test）-CT（calibritor），各样品mRNA表达水平均用2-△△CT表示。

1.5 统计学处理 运用SPSS 13.0软件包对所得数据进行统计学处理，计量数据使用（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD检验法，以P＜0.05为差异有统计学有意义。

2 结果

2.1 大鼠行为学评价 对照组、柴胡皂苷组、氟西汀组第14及21天糖水偏爱度均高于模型组，比较差异均有统计学意义（P＜0.01），见表1。

2.2 柴胡皂苷对大鼠海马JNK、Bad mRNA表达的影响 对照组、柴胡皂苷组、氟西汀组JNK、Bad mRNA表达量均低于模型组，比较差异均有统计学意义（P＜0.01），见表2。

表1　各组大鼠糖水偏爱度比较（±s）　％

表1　各组大鼠糖水偏爱度比较（±s）　％

*与模型组比较，P＜0.01

组别　　实验前　　第7天　　第14天　　第21天对照组（n＝15）　69.47±7.09　72.80±6.53　77.91±1.76*　82.13±10.01*模型组（n＝15）　 68.39±11.05　66.73±8.63　51.77±13.87　37.62±12.64柴胡皂苷组（n＝15）　67.28±9.58　65.71±6.73　72.23±12.07*　76.58±11.72*氟西汀组（n＝15）　68.77±9.43　65.49±6.40　74.27±13.74*　75.66±12.36*

表2　各组大鼠JNK、Bad mRNA相对表达量比较（±s）

表2　各组大鼠JNK、Bad mRNA相对表达量比较（±s）

*与模型组比较，P＜0.01

组别　JNK mRNA　Bad mRNA对照组（n＝15）　 1.01±0.02*　1.27±0.10*模型组（n＝15）　5.23±0.18　 4.26±0.47柴胡皂苷组（n＝15）　3.13±0.20*　3.41±0.25*氟西汀组（n＝15）　2.76±0.14*　3.01±0.45*

3 讨论

随生活环境改变，影响人类健康的心境疾病逐年增多，其中尤以抑郁症为著，为探讨抗抑郁新药国内外科研团队开展了多年的研究[4-5]。抑郁症的机制复杂，根治不彻底是现今医疗界的难题[6]。本实验采用孤养结合CUMS复制大鼠抑郁模型，探讨柴胡皂苷的抗抑郁作用。

本实验采用糖水消耗量检测评价大鼠抑郁程度。随造模时间增加，大鼠抑郁样症状加重，糖水偏爱度减少证实其快感缺失严重。通过糖水消耗实验证实本实验成功复制大鼠抑郁模型。

JNK属于细胞丝裂原活化蛋白激酶（mitogenactivatedprotein kinase kinase kinase，MAP3Ks）家族的成员[8]。JNK蛋白可被紫外线照射、炎性因子等多种凋亡刺激所激活[9-10]。激活的JNK又可导致下游级联反应，促进神经元凋亡。JNK激活后可通过两条途径发挥作用：一是上调促凋亡相关蛋白的表达从而激活死亡受体凋亡通路，另一条途径是通过调节Bcl-2家族成员的活性参与线粒体介导的细胞凋亡通路。

凋亡蛋白Bad是Bcl-2家族成员之一。Bad在外周及中枢神经元、淋巴细胞、生殖细胞及许多上皮细胞中均有表达[11-12]。Bad在凋亡刺激信号作用于促凋亡成员时发生构型改变，易位并插入线粒体外膜发挥促凋亡活性[13]。

综上所述，本研究采用慢性不可预见性应激刺激结合孤养，成功建立抑郁大鼠模型，主要表现为糖水消耗量减少。本实验通过柴胡皂苷与氟西汀对抑郁大鼠进行灌胃给药后，大鼠海马神经元中JNK蛋白表达明显降低，其下游蛋白亦发生级联反应，Bad蛋白呈现低表达。说明柴胡皂苷可能通过抑制海马神经元JNK蛋白表达，下调Bad蛋白表达，从而减少神经细胞凋亡。

目前抑郁症的病理机理尚不完全明确[14-15]。但结合大鼠糖水消耗量的改善，可以证实，柴胡皂苷抗抑郁作用明显，其抗抑郁作用的机制可能与降低大鼠海马组织中的JNK、Bad蛋白表达有关。

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Protective Effect of Saikosaponin on the Hippocampal Neuron of Depression Model Rats

/CAI Zhenzhen，XU Guang-you，DONG Hai-ying，et al.//Medical Innovation of China，2016，13（03）：028-030

【Abstract】Objective：To investigate the protective effect of Saikosaponin on the behavior and the apoptosis of hippocampus neurons in depression model rats.Method：60 SD rats were randomly divided into the control group，the model group，the Saikosaponina group and the Fluoxetine group，15 rats in each group.Solitary and chronic mild unpredictability stimulation were used to copy the model of depression.From the second day after modeling successfully，the Saikosaponina group and the Fluoxetine group were given intragastrical administration.On the first，seventh，fourteenth and twenty-first day of the experiment，sugar water consumption experiment was used to detect the behavioral change of the rats.Real-time PCR was used for the quantitative analysis of JNK，Bad mRNA. Result：The preference degree of sugar water in the the control group，the Saikosaponina group and the Fluoxetinebook=29,ebook=33group was higher than that in the model group，the expression quantities of JNK，Bad mRNA in the the control group，the Saikosaponina group and the Fluoxetine group were lower than those in the model group，the differences were all statistically significant（P＜0.01）.Conclusion：Saikosaponina can effectively control the depressive symptoms of rats. Its mechanism may be related to the decreasing of JNK，Bad protein expression in hippocampus.

【Key words】Saikosaponin； Hippocampus； Depression； Apoptosis signal regulating kinase-1

收稿日期：（2015-12-09） （本文编辑：王利）

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.03.009

通信作者：张静艳

*基金项目：黑龙江省教育厅科学技术研究项目（12531784）