耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec分型及耐药性分析

吴　宇，王贵宇，余　瑶，徐　莉，黄君富

(第三军医大学第一附属医院检验科，重庆 400038)



·论著·

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec分型及耐药性分析

吴宇，王贵宇，余瑶，徐莉，黄君富△

(第三军医大学第一附属医院检验科，重庆 400038)

摘要:目的探讨临床分离的346株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株的临床分布、SCCmec分型及其对常用抗菌药物的耐药情况。方法选择2014年1月至2015年1月该院分离的784例金黄色葡萄球菌(SA)，采用PCR方法对其进行MRSA 及MRSA SCCmec基因分型鉴定，并对其检出分布及耐药性进行分析。结果784株SA中MRSA 346株(占44.13%)，MRSA中来自痰液占43.06%，伤口分泌物占48.55%；MRSA对青霉素、左氧氟沙星、红霉素耐药性较高，对万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁均敏感。MRSA 经SCCmec分型，共发现SCCmecⅡ型 130株，SCCmecⅢ型 196株，SCCmecⅣ 型11株，SCCmecV型9株。结论该院分离的MRSA以SCCmecⅢ型为主，MRSA对多种抗菌药物具有耐药作用，但对万古霉素、替考拉宁等敏感。

关键词:金黄色葡萄球菌；耐甲氧西林；耐药性

金黄色葡萄球菌(SA)是引起临床化脓性感染的常见致病菌之一，自1961年英国首次发现耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)以来，MRSA的耐药性及检出率逐年升高，目前已成为引发院内感染重要的致病菌之一[1-2]，因此，监测MRSA的感染情况及对抗菌药物的耐药情况，为临床用药提供合理依据显得极为重要。本文将本院2014年1月至2015年1月临床分离出的346株MRSA的SCCmec基因进行分型，并对其临床分布情况、耐药性进行分析,现将结果报道如下。

1材料与方法

1.1菌株来源SA菌株为2014年1月至2015年1月西南医院门诊及住院患者各类标本中分离而来，共784株，其中MRSA 346株。质控菌株金黄色葡萄球菌(ATCC2923)、质控菌株MRSA(ATCC43300)为本院检验科保存。

1.2仪器与试剂药敏纸片(Oxoid公司，英国)；TaKaRa细菌基因组DNA小量纯化试剂盒[宝生物工程 (大连)有限公司]、100 bp DNA标记物[宝生物工程(大连)有限公司]、琼脂糖(BIOWEST，西班牙)；TaKaRa Ex Taq®Hot Start Version[宝生物工程(大连)有限公司]；其他试剂均购自国药集团。PCR仪(ABI公司；美国)；水平电泳仪(北京君意东方电泳设备有限公司)、凝胶成像系统(Bio-Rad，美国)。MRSA PCR鉴定引物及SCCmec基因分型引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

1.3方法

1.3.1基因组DNA的提取按常规方法接种培养、分离纯化收集到的标本，使用TaKaRa细菌基因组DNA小量纯化试剂盒提取细菌基因组DNA，具体方法按照试剂盒说明书进行。

1.3.2MRSA的鉴定Nuc为耐热核酸酶基因，用于SA的鉴定；MecA基因为甲氧西林耐药决定子A，用于MRSA的鉴定。根据文献[3] MRSA鉴定引物，具体序列见表1。MRSA双重PCR反应条件为94 ℃ 5 min；94 ℃ 50 s，59 ℃ 45 s，72 ℃ 90 s，共35个循环；72 ℃ 5 min。PCR反应结束后，取10 μL PCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳分析。

表1　　MRSA鉴定引物序列

1.3.3SCCmec基因分型根据文献[4-5]合成SCCmec基因特异引物，具体序列见表2(见《国际检验医学杂志》网站主页“论文附件”)。SCCmec多重PCR反应条件为94 ℃ 5 min；94 ℃ 45 s，65 ℃ 45 s，72 ℃ 90 s，10个循环；94 ℃ 45 s，55℃ 45 s，72 ℃ 90 s，30个循环；72 ℃ 10 min。PCR反应结束后，取10 μL PCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳分析。PCR鉴定正确后，PCR产物送至生工生物工程(上海)股份有限公司进一步测序验证。

1.3.4药敏试验采用E-Test法对分离到的MRSA进行药敏试验。

2结果

2.1MRSA的鉴定及检出情况2014年1月至2015年1月本院门诊及住院患者标本中共分离出SA 784株，其中MRSA 346株，占44.13%，MRSA的PCR鉴定见图1(见《国际检验医学杂志》网站主页“论文附件”)。检出MRSA的患者中，男性患者178，占51.45%，女性患者168，占48.55%。MRSA检出率较高的科室为烧伤科、儿科、ICU，具体见表3。在各类送检标本中，MRSA检出率在痰液和伤口分泌物标本中相对较高，分别占45.57%、44.80%，见表4。

2.2MRSA的基因分型本研究通过PCR方法共分离鉴定到SCCmecⅢ型 196株，占56.65%；SCCmecⅡ型130株，占37.57%；SCCmecⅣ型 11株，占3.18%；SCCmecⅤ型 9株，占2.60%。未发现其他型别MRSA。鉴定电泳图见图2(见《国际检验医学杂志》网站主页“论文附件”)。

2.3药敏试验本研究分离到的SCCmecⅡ型、SCCmecⅢ、SCCmecⅣ及SCCmecⅤ型 MRSA的具体耐药情况见表5。

表3　　SA科室分布及MRSA检出情况

表4　　SA、MRSA的来源及检出情况

表5　　不同SCCmec分型MRSA的耐药情况分析

3讨论

近年来，MRSA的检出率逐年升高，已成为临床感染的常见致病菌之一。本研究共分离到MRSA 346株，占SA的44.13%。从临床分布来看，MRSA检出率最高的科室依次为烧伤科、儿科与ICU，原因可能与这些科室的患者病情严重，免疫系统功能低下，或频繁的侵入性操作，需要大量运用抗菌药物有关。在各类送检标本中，伤口分泌物及痰液MRSA检出率分别为45.57%、44.80%，表明伤口与下呼吸道感染仍是MRSA感染的主要方式。

MRSA基因分型方法包括脉冲场凝胶电泳、多位点序列分型、葡萄球菌蛋白A分型、葡萄球菌染色体mcc盒(SCCmec)分型等，其中SCCmec染色体盒是MRSA中与 mecA 基因密切相关的葡萄球菌染色体盒重组酶基因，根据SCCmec基因型不同可将MRSA分为社区获得性MRSA (CA-MRSA) 与医院获得性MRSA (HA-MRSA)，HA-MRSA携带SCCmec基因型通常为SCCmecⅠ、Ⅱ、Ⅲ 型，这些基因片段较大，可携带多个耐药基因，通常表现为多重耐药。而CA-MRSA则携带Ⅳ、Ⅴ型，基因片段较小，临床中对抗菌药物敏感度较高[6-7]。在本研究分离的346株MRSA中，主要为SCCmecⅢ型和SCCmecⅡ型，分别占56.65%、37.57%，SCCmecⅣ型 及Ⅴ型亦有检出。药敏试验结果显示，所有菌株对青霉素、苯唑西林均耐药，对红霉素、头孢西丁、克林霉素、庆大霉素、左氧氟沙星耐药率均高于80%，所有菌株对利福平耐药率较低；未检测到耐万古霉素及替考拉宁的菌株，SCCmecⅡ对红霉素的耐药性低于其他3种型别；SCCmecⅢ对庆大霉素的耐药率高于其他3种型别，SCCmecⅤ对克林霉素、庆大霉素的耐药性低于其他3种型别，SCCmecⅢ与SCCmecⅤ对多种抗菌药物的耐药率均为100%，明显高于其他分型。

综上所述，随着抗菌药物的滥用，MRSA的感染及其流行已日趋严重，除万古霉素、替考拉宁与利福平外，MRSA对其他抗菌药物都有较高的耐药率。本次研究未发现万古霉素耐药菌株，而世界上已经发现万古霉素耐药的SA报道[8]。因此，应该加强对MRSA监测，合理使用抗菌药物，降低万古霉素耐药的SA出现。除此之外，医院各科室应做好定时消毒，加强对医护人员的培训，切断MRSA接触传播的途径。

参考文献

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[2]孙恒彪，黄敬，张婧，等.286株金黄色葡萄球菌临床分布及耐药性分析[J].国际检验医学杂志，2014，35(22)：3061-3063.

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[5]Oliveira DC,De Lencastre H.Multiplex PCR strategy for rapid identification of structural types and variants of the mec element in methicillin-resistant Staphylococcus aureus[J].Antimicrob Agents Chemother,2002,46(7):2155-2161.

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[7]梁蓓蓓，王睿.社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)感染特点及治疗对策的研究进展[J].中国药物应用与监测，2011，8(6)：325-329.

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Methicillin-resistant Staphylococcus aureus SCCmec parting and resistance analysis

WuYu,WangGuiyu,YuYao,XuLi,HuangJunfu△

(DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstHospitalAffiliatedtotheThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China)

Abstract:ObjectiveTo analyze the clinical distribution,antimicbial resistance and Staphylococcal cassette chromosome mec(SCCmec) genotype characteristics of 346 methicillirrresistant Staphylococcus aureus (MRSA) clinical isolates in the hospital.MethodsA total of 784 strains of Staphylococcus aureus isolated from January 2014 to January 2015 in the hospital，MRSA identification and the SCCmec genotype was conducted by PCR assay.Results346 strains of MRSA (44.13%) were isolated from 784 strains of Staphylococcus aureus，the detection rate of MRSA from sputum accounted for 43.06%，the secretion accounted for 48.55%.MRSA was resistant to penicillin,levofloxacin and erythromycin，sensitive to vancomycin,linezolid and teicoplanin.SCCmec genotyping result showed that SCCmecⅡ was identified in 130，SCCmecⅢ in 196，SCCmecⅣ in 11，SCCmecⅤ in 9.ConclusionSCCmecⅢ is the main genotypes of MRSA from our Hospital，all of the MRSA strains are multi-resistant to tested antibiotics，but sensitive to vancomycin and teicoplanin.

Key words:Staphylococcus aureus；anti-methicillin-resistant；drug resistance

(收稿日期：2015-10-08)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.009

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)04-0455-03

作者简介：吴宇，女，主管检验技师，主要从事临床免疫与微生物学检验研究。△通讯作者，E-mail：junfu_huang@126.com。