鸡堆型艾美耳球虫Hsp90克隆表达及其核酸疫苗的免疫保护作用

冯　俪，聂思静，黄艺华，黄小丹，蔡皓璠，马德星，李广兴（.东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨50030；.黑龙江职业学院，黑龙江哈尔滨50080）



鸡堆型艾美耳球虫Hsp90克隆表达及其核酸疫苗的免疫保护作用

冯俪1，聂思静1，黄艺华1，黄小丹1，蔡皓璠2，马德星1，李广兴1
（1.东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨150030；2.黑龙江职业学院，黑龙江哈尔滨150080）

摘要：利用RT-PCR方法从鸡堆型艾美耳球虫（E.acervulina）子孢子中成功克隆热休克蛋白90（Hsp90）基因，并构建其原核和真核表达质粒pET30a-Hsp90和pVAX-Hsp90。重组表达的89 kD可溶蛋白免疫家兔制备多克隆抗体，间接ELISA和Western-Blot表明，其反应性和特异性良好。真核表达质粒pVAX-Hsp90体外瞬时转染间接免疫荧光检测可见成功表达。雏鸡真核表达质粒免疫后进行攻虫保护试验，结果表明，pVAX-Hsp90组较空载体组及PBS组增重极明显（P＜0.01），且肠道病变减轻，OPG减少，抗球虫指数为166.17。综上初步评价了Hsp90核酸疫苗的免疫保护作用，表明Hsp90是一种潜在的鸡球虫保护性抗原。

关键词：堆型艾美耳球虫；热休克蛋白90；克隆表达；核酸疫苗；免疫保护

鸡球虫是由包括堆型艾美耳球虫（Eimeria acervulina）在内的7种常见艾美耳球虫引起的一种寄生虫病。寄生虫侵入鸡肠道组织并分裂增殖使其发生损伤而导致腹泻、血便和体重降低，对养禽业造成严重的经济损失[1]。热休克蛋白90 （heat shock protein 90，Hsp90）是热休克蛋白家族中的重要成员，广泛存在于从低等原核生物到高等哺乳动物中。Hsp90是一种进化保守的蛋白质，在分子伴侣功能、细胞循环调控、抗原传递方面发挥着重要作用[2]。……