辣椒疫霉病无毒基因RXLR128001克隆与蛋白表达纯化

王晓梅，张钟文，杨　楠吉林农业大学农学院，吉林长春130118



辣椒疫霉病无毒基因RXLR128001克隆与蛋白表达纯化

王晓梅*，张钟文，杨楠
吉林农业大学农学院，吉林长春130118

摘要：本文从强致病辣椒疫霉菌SD33分离克隆了1个效应分子RXLR128001基因，利用生物信息学软件BLAST and SignalP4.1 Server，分析了该效应分子的基因序列结构。在此基础上进行了该基因大肠杆菌（Escherichia coli）表达与纯化，界定了适宜该基因高效表达的诱导条件，经过亲和层析和离子交换层析，获得了RXLR128001基因较高纯度的蛋白，以利于后续晶体的培养与优化研究。

关键词：辣椒疫霉；效应蛋白；基因克隆；蛋白表达纯化

辣椒疫霉病（Phytophthora capsici）是一种重要的土传卵菌病害[1，2]，呈世界性分布，该病害严重发生，常给辣椒生产造成严重减产，乃至绝收[3]。其病原菌寄主范围广，可侵染辣椒、西葫芦、黄瓜、茄子、番茄等20多种作物[4]。近年来，已有关于辣椒疫霉菌关键致病因子及致病流行机制的探索研究[5，6]。

植物病原菌侵染寄主植物过程中常分泌若干效应蛋白分子（effectors）[7]，植物病原卵菌在与寄主植物互作过程中，也分泌效应蛋白分子进入寄主细胞中，通过破坏或干扰寄主细胞代谢，而促进自身的分泌和传递[7]。病原卵菌效应蛋白具诱导寄主细胞坏死而导致寄主植物发病，或诱导寄主细胞产生防卫反应的性能[8]。这类效应分子共同特点是在N-端含有一个信号肽，协助效应分子分泌渗入寄主细胞内，后比邻一个保守的RXLR-dEER motif，该类效应蛋白分子通常含100至400个氨基酸[9-11]。生物信息学比……