相关蛋白在携带载脂蛋白-J基因大鼠BMSCs中的表达及意义

刘学良，周 冲，徐 斌，郑晓梅，刘 亮

(泸州医学院附属医院：1. 神经外科；2. 神经内科，四川泸州 646000)



相关蛋白在携带载脂蛋白-J基因大鼠BMSCs中的表达及意义

刘学良1，周 冲1，徐 斌1，郑晓梅2，刘 亮1

(泸州医学院附属医院：1. 神经外科；2. 神经内科，四川泸州 646000)

目的 检测重组质粒pEGFP-N1-apoJ在不同量、不同时间条件下转染大鼠骨髓间充质干细胞的瞬时转染效率，并测定载脂蛋白-J(ApoJ)在靶细胞中能否高表达。方法 贴壁培养细胞，并用脂质体LipofectaminTM2000分别介导0.8、1.2、1.6、2.0 μg重组质粒pEGFP-N1-apoJ转染，置荧光显微镜下观察转染结果，测定在24、48、72 h时间点的瞬时转染效率。蛋白免疫印迹法分别检测pEGFP-N1-apoJ质粒转染组、空pEGFP-N1质粒转染组、空白对照组ApoJ的表达情况。结果 不同的质粒量中1.6 μg pEGFP-N1-apoJ质粒与3.0 μL脂质体制备的复合物瞬时转染效率最高，分别作用24、48、72 h可达27.8%、34.3%、28.2%。蛋白免疫印迹法检测到pEGFP-N1-apoJ质粒组大量ApoJ表达，空质粒及空白对照组见微量ApoJ表达；并且pEGFP-N1-apoJ质粒组Apo-J的表达明显高于空载体及空白对照组(P<0.05)。结论 利用脂质体介导可将重组质粒pEGFP-N1-apoJ成功转染入大鼠骨髓间充质干细胞，ApoJ在大鼠骨髓间充质干细胞中得到大量表达。

载脂蛋白-J；重组质粒；骨髓间充质干细胞； 瞬时转染；蛋白免疫印迹法

载脂蛋白J(ApoJ或称clusterin, CLU)是从人血浆HDL中新分离出的一种酸性糖蛋白，分子量70 ku，由α及β亚基通过二硫键相连而成,广泛分布于人体各种组织,脑组织内主要是由星形胶质细胞产生。ApoJ除了负责运输脂质外，还参与精子成熟、膜再循环及神经元的保护等生理过程[1]。在损伤组织中，ApoJ基因表达升高，参与组织损伤的修复，可抑制补体介导的细胞毒作用，调控细胞的死亡和细胞膜的更新。相关研究显示ApoJ在多种神经系统疾病中均有高表达[2]。……