结直肠癌患者外周血LAP+CD4+调节性T细胞的分离纯化及功能鉴定

阳祖庆,江志远,钟武,王时俊,曹云飞

(广西医科大学第一附属医院，南宁530021)



结直肠癌患者外周血LAP+CD4+调节性T细胞的分离纯化及功能鉴定

阳祖庆,江志远,钟武,王时俊,曹云飞

(广西医科大学第一附属医院，南宁530021)

目的 应用免疫磁珠分选法分离纯化结直肠癌患者外周血中LAP+CD4+调节性T细胞(LAP+CD4+T)，并对分选获得的目的细胞进行体外功能的初步研究。方法 按照免疫磁珠两步法(阴性分选和阳性分选)分离结直肠癌患者外周血单个核细胞中的LAP+CD4+T细胞，流式细胞术(FACS)检测分选后细胞的纯度；台盼蓝染色检测细胞存活率；CCK-8掺入法检测其对LAP-CD4+T细胞的增殖抑制效应；ELISA法检测体外细胞因子TGF-β和IL-10表达。结果 经免疫磁珠法分选获得的LAP+CD4+T细胞纯度为(95.16±2.11)%，台盼蓝染色细胞存活率为(93.64±1.33)%。CCK-8掺入法检测结果显示LAP+CD4+T细胞干预后LAP-CD4+T细胞生长明显受到抑制(P=0.000)；ELISA结果显示LAP+CD4+T细胞较LAP-CD4+T细胞分泌更高浓度的细胞抑制因子TGF-β和IL-10(P=0.000)。结论 免疫磁珠法分选结直肠患者外周血中LAP+CD4+T细胞具有高效、快捷、纯度高等优点，且不损伤细胞活性。

结直肠癌；免疫磁珠法；LAP+CD4+调节性T细胞

结直肠癌(CRC)是胃肠道疾病中常见的恶性肿瘤，美国国家癌症协会2014年最新数据显示，CRC的发病率和病死率排在常见致死性恶性肿瘤疾病的第三位[1]。目前我国CRC病死率排在恶性肿瘤死亡疾病的第五位[2]。CRC的恶性增殖与机体免疫功能下降及肿瘤细胞的免疫逃逸分不开[3,4]。已有研究结果显示调节性T淋巴细胞可富集到胃癌、乳腺癌、肺癌等肿瘤患者的外周血及其肿瘤组织中，提示其可能参与胃癌、乳腺癌、肺癌等肿瘤细胞的免疫逃逸[3～5]，并且在肿瘤的发生和发展过程中发挥重要作用。……