CBS基因过表达PC12 细胞株的建立及鉴定

尹蔚兰，廖志强，阳柏成，姜骆永，文芳，邬力祥

(1中南大学基础医学院，长沙410083; 2南华大学医学院)



CBS基因过表达PC12 细胞株的建立及鉴定

尹蔚兰1,2，廖志强2，阳柏成2，姜骆永2，文芳1，邬力祥1

(1中南大学基础医学院，长沙410083; 2南华大学医学院)

目的建立胱硫醚-β-合成酶(CBS)基因过表达PC12细胞株并进行鉴定。方法根据GenBank数据库中的CBS cDNA序列设计合成CBS基因引物，PCR扩增CBS基因，并将其克隆到慢病毒过表达载体GV341中，用慢病毒过表达载体连同两种包装病毒载体对293T细胞进行转染，收获含CBS慢病毒载体的上清液，用其感染正常的PC12细胞，用嘌呤霉素进行筛选得到CBS基因过表达PC12细胞株。用实时荧光定量PCR法检测所得PC12细胞(观察组)、空载体转染的PC12细胞(对照组)、正常PC12细胞(空白组)中的CBS mRNA。用Western blot法检测上述三组细胞中的CBS 蛋白。结果观察组、对照组、空白组PC12细胞CBS mRNA表达量分别为162.20±11.20、1.00±0.03、2.30±0.07，CBS蛋白表达量分别为1.53±0.09、1.00±0.10、0.96±0.10。观察组PC12细胞CBS mRNA、蛋白表达量均高于对照组和空白组(P均<0.05)，对照组PC12细胞CBS mRNA、蛋白表达量与空白组相比差异均无统计学意义。结论成功构建CBS基因过表达PC12细胞株。

PC12细胞；胱硫醚-β-合成酶；慢病毒载体

H2S是一氧化碳和一氧化氮之后被发现的第三种气体信号分子，广泛参与人体的生理病理过程。研究表明，H2S与神经系统疾病关系密切，具有抗氧化、抗凋亡、抗炎等作用，被认为是一种新型的神经调质。但是H2S作为一种气体分子，性质活泼，容易挥发，不利于进行科学研究和临床应用。胱硫醚-β-合成酶(CBS)是脑内H2S的主要合成酶。通过改变CBS基因的表达来改变内源性H2S 的生成，对研究H2S 与神经细胞疾病的关系具有非常重要的作用。2014年10月～2015年3月，我们用CBS过表达慢病毒载体转染PC12细胞建立了CBS过表达PC12细胞株，为深入研究H2S与神经系统疾病关系提供稳定的细胞株。……