不同外植体及激素组合对贴梗海棠愈伤组织诱导的影响

贾晓梅++周悦++曹柳青++黄璞璐

摘要：以当年生幼嫩枝条、2～3年生枝条的叶片为试验材料，分别采用0.1%HgCl2溶液、2%NaClO溶液进行消毒处理，运用对比试验的方法进行贴梗海棠愈伤组织的诱导研究，结果表明，诱导愈伤组织的最适外植体为叶片，最适培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA。

关键词：贴梗海棠；外植体；激素组合；愈伤组织；诱导

中图分类号： S685.990.4+3文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2016）02-0054-02

收稿日期：2015-03-31

基金项目：河北省高等学校科学技术研究项目（编号：Z2013008）；保定学院本科教学工程建设项目（编号：20120205、Xk20130601）；保定学院科研基金（编号：2012Z08）；保定学院科研团队（编号：KYTD2013001）；河北省科技计划（编号：15227527）。

作者简介：贾晓梅（1978—），女，硕士，副教授，主要从事植物生理和生物技术研究。E-mail：jxmqiang@aliyun.com。

贴梗海棠[Chaenomeles speciosa（Sweet）Nakai]是蔷薇科木瓜属植物，为落叶灌木，耐旱、喜光、耐寒，抗逆性极强。其花色艳丽，气味芳香，被广泛应用于城乡绿化、庭院美化；其果实别称皱皮木瓜，富含多种营养成分[1]，为常用中药，可舒筋活络、驱风止痛[2]；其叶片具有抗氧化和保肝功效[3]。可见，贴梗海棠是一种具有多用途的优良园林绿化植物。

贴梗海棠的繁殖多采用传统的种子繁殖和无性繁殖（扦插、嫁接、压条等）[4]。为提高贴梗海棠的品质，部分学者已对其育苗[5]、花期调控[6]、嫁接技术[7]、栽培管理[8]等方面进行了研究；为突破繁殖材料的数量限制、加快推广速度，部分学者已将组织培养技术应用于贴梗海棠的快速繁殖[9-10]，初步建立了快繁体系，但关于贴梗海棠愈伤组织培养的研究鲜有报道。通过研究不同外植体和激素组合对其愈伤组织诱导的影响，以期为贴梗海棠的遗传转化育种开辟一条有效途径，为该品种的开发和推广奠定技术基础。

1材料与方法

1.1试验材料

试验材料由三禾苗圃提供，取贴梗海棠当年生幼嫩枝条、2～3年生枝条的叶片为外植体。

1.2试验方法

1.2.1材料消毒将新生幼嫩枝条用加入少量皂粉的自来水浸泡30 min，再用自来水冲洗1.0～1.5 h，去除肉眼可见的灰尘及其他杂质。在无菌操作台内，将试验材料用75%乙醇消毒30 s后分为两半，一半转入0.1% HgCl2溶液中浸泡7～8 min，再用无菌水冲洗3～4次；另一半转入2% NaClO溶液中浸泡15 min，再用无菌水冲洗3～4次。将消毒后的材料置于无菌滤纸上，吸干接种材料表面的多余水分。将叶片切成0.5 cm2的小块，或在完整叶片上划出网格状伤口，嫩茎、幼芽的长度均为0.5～1.0 cm，分别接种于诱导愈伤培养基上。每种外植体分别在各体积分数梯度激素的培养基上接种10瓶，叶片每瓶接种4块，茎段每瓶接种4段，幼芽每瓶接种3个。

1.2.2培养基以MS为基本培养基，附加不同种类激素体积分数配比组成的9种培养基（表1）。培养基均附加蔗糖 30 g/L、琼脂8 g/L，pH值为5.8，培养温度为（25±2） ℃，光照度为2 000 lx，每天光照8 h。

2结果与分析

2.1不同消毒方法对污染率的影响

在对外植体的消毒过程中，分别选用2% NaClO溶液、0.1% HgCl2溶液进行消毒处理。由表2可知，选用0.1% HgCl2溶液进行浸泡消毒的外植体污染率远远低于选用2% NaClO溶液消毒的外植体，2% NaClO溶液处理后污染率均在10%及以上，而0.1% HgCl2溶液处理后消毒效果明显改善，叶片、茎段、幼芽污染率分别为2.5%、2.5%、0。

2.2不同处理方式对诱愈结果的影响

由表3可知，在诱愈培养基上接种20 d后，通过诱导过程发现划有网格状伤口的全叶外植体出愈率（22%）远远低于切成小块的叶片外植体（67%）， 故将经过处理的全叶外植

2.3不同激素组合对茎段愈伤组织的影响

茎段愈伤组织产生于两端切面处，诱导初期质地松软、呈半透明乳白色。在诱愈培养基上接种20 d后，有84%茎段均诱导出愈伤组织，与叶片、嫩芽等外植体相比，茎段愈伤组织出现最早。将茎段产生的愈伤组织继代转接，均能增殖。培养20 d发现大部分培养基中增殖的愈伤组织与诱导初期一样质地松软、没有光泽，并随培养时期的延长而褐变死亡，仅3、5、9号培养基上的愈伤组织出现生长，其中9号培养基上的愈伤组织状态最好，出现质地松脆的绿色愈伤组织（表4）。

2.4不同激素组合对叶片愈伤组织的影响

叶片愈伤组织多发生于切面，少数愈伤组织由叶片表层细胞产生，多数呈乳白色，少数呈绿色。由表5可知，接种 20 d 后约80%叶片能诱导出愈伤组织，但4、5、7号培养基出愈率较低，仅为60%。在转接愈伤组织继代培养的过程中，2、3、6号培养基中愈伤组织的增殖能力远远高于其他培养基；其他培养基上的愈伤组织虽能增殖，但表现松、软、过于散碎，并随培养时间的延长陆续褐变死亡。在3号培养基上诱导出的绿色愈伤组织与茎段、幼芽等外植体诱导出的状态良好的愈伤组织相比质地更松脆。

2.5不同激素组合对幼芽诱导的影响

在诱愈培养基上接种10 d左右，幼芽开始伸长生长；20 d后部分培养基中的幼芽平均可长至3.3 cm。在诱导过程中幼芽基部长出丛芽，而幼芽所诱导的愈伤组织多在丛芽部位，

其质地松软，转接后增殖培养，褐化率高达97%，短时期内均褐变死亡。由表6可知，在幼芽诱导与继代增殖的过程中，接种于8号培养基的幼芽生长速度最为迅速，且形成的丛芽数量也多于其他培养基，与接种于其他培养基的幼芽相比具有明显优势。

3结论

本试验选择贴梗海棠的叶片、茎段、幼芽作为外植体，研究不同外植体及激素组合对贴梗海棠愈伤组织诱导的影响。结果表明，在选择消毒剂时，0.1% HgCl2溶液处理远远好于2% NaClO溶液处理；叶片进行0.5 cm2的分割处理出愈率高于划有网格状伤口的全叶。在所有外植体愈伤组织的诱导和继代增殖过程中，茎段、叶片、幼芽的愈伤组织出愈率分别为84%、80%、11%，而幼芽的褐化率最高（97%）、叶片最低（37%），且由叶片产生的绿色愈伤组织质地更为松脆，增殖能力比茎段和幼芽产生的更强。由此确定诱导愈伤组织的最适外植体为叶片，最适培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA。

[HS2*2][HT8.5H]参考文献：[HT8.SS]

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[3]孔祥密. 垂丝海棠和贴梗海棠抗氧化和保肝作用研究[D]. 开封：河南大学，2014.

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