RIPK3基因转染的SH-SY5Y细胞中HIF-1α基因及其信号通路相关基因表达变化

张国禄，程世翔，徐忠伟，衣泰龙，廖吉连，涂悦，张赛

(1武警后勤学院附属医院脑科医院*，天津300162；2武警后勤学院中心实验室)



RIPK3基因转染的SH-SY5Y细胞中HIF-1α基因及其信号通路相关基因表达变化

张国禄1，程世翔1，徐忠伟2，衣泰龙1，廖吉连1，涂悦1，张赛1

(1武警后勤学院附属医院脑科医院*，天津300162；2武警后勤学院中心实验室)

摘要：目的观察受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)基因转染的神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中低氧诱导因子1α(HIF-1α) mRNA及其信号通路相关基因表达变化。方法 构建表达RIPK3基因的pCMV6-AC-GFP质粒(重组质粒)，培养SH-SY5Y细胞，分为实验组及对照组，分别转染重组质粒和空载质粒。采用Western blotting法检测细胞中的RIPK3蛋白，分别于培养8、14、20、26、32、38 h后，通过MTT实验检测细胞增殖情况(OD值)。采用转录组测序技术(RNAseq)及Ingenuity Pathway Analysis(IPA)软件检测并筛选RIPK3-HIF1α下游信号通路中的关键基因。采用微滴式数字PCR(ddPCR)检测两组细胞中的HIF-1α mRNA。结果实验组细胞中RIPK3蛋白相对表达量(0.806±0.097 5)高于对照组(0.455±0.088 6)，P<0.05。随培养时间延长，实验组细胞增殖受到抑制。实验组细胞中HIF-1α mRNA相对表达量(0.015 43±0.003 47)低于对照组(0.046 28±0.010 26),P<0.05。在HIF-1α为核心的相互作用关系网络中，筛选出关键分子泛素缀合酶样蛋白(UBC)、希佩尔-林道蛋白(VHL)、转录延伸因子B多肽1(TCEB1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)。结论 RIPK3基因转染SH-SY5Y后，细胞中HIF-1α mRNA表达下调，同时HIF-1α信号通路相关基因(UBC、VHL、TCEB1、VEGFA)的表达水平受到影响。

关键词：神经母细胞瘤；受体相互作用蛋白激酶3；低氧诱导因子1α；泛素缀合酶样蛋白；希佩尔-林道蛋白；转录延伸因子B多肽；血管内皮生长因子A

受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)属于受体相互作用蛋白家族(RIPs)成员。作为肿瘤坏死因子(TNF)重要的下游效应分子，RIPK3广泛表达于人体各组织，并被证实在细胞增殖、凋亡过程中发挥重要作用[1~4]。低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达于所有已知的多细胞物种[5]，是组织适应缺氧环境的重要转录因子[6]，在缺血再灌注、肿瘤及黏膜炎症等进程中发挥作用[7, 8]。本研究建立了稳定表达RIPK3的人神经母细胞瘤细胞模型，观察细胞中HIF-1α及其下游信号分子转录水平的变化，探索RIPK3的潜在作用及其信号通路网络。……