维吾尔药铁力木不同极性部位体外抗氧化作用的研究

马俊鹏，王新玲，李　芸，胡君萍，王小青，丁燕楠，王晓梅

(1.新疆维吾尔自治区人民医院米东医院药械科，新疆 乌鲁木齐　830000；2. 新疆医科大学药学院，

新疆 乌鲁木齐　830011；3.新疆生产建设兵团第五师医院药剂科，新疆 博乐　833400)



◇药学研究◇

维吾尔药铁力木不同极性部位体外抗氧化作用的研究

马俊鹏1，王新玲2，李芸3，胡君萍2，王小青2，丁燕楠2，王晓梅2

(1.新疆维吾尔自治区人民医院米东医院药械科，新疆 乌鲁木齐830000；2. 新疆医科大学药学院，

新疆 乌鲁木齐830011；3.新疆生产建设兵团第五师医院药剂科，新疆 博乐833400)

摘要：目的研究维吾尔药铁力木不同极性部位的体外抗氧化活性。方法以Vc为对照，通过测定铁力木乙醇提取物、水提取物及乙醇提取物石油醚(沸程60～90℃)、乙酸乙酯、正丁醇、水各萃取物对Fe(3+)的还原能力、对DPPH自由基(DPPH·)和超氧自由基)的清除能力，研究铁力木的体外抗氧化活性。结果铁力木各部位对Fe(3+)均表现出一定的还原能力，对DPPH·及均表现出一定的清除作用，但作用均弱于VC。其中水层及正丁醇层对Fe(3+)的还原能力较强，而其石油醚层和乙酸乙酯层还原能力较弱；水层和水提取物对DPPH·具有一定的清除能力；石油醚层及水提取物清除的作用较强。结论铁力木具有较好的抗氧化能力。

关键词：铁力木；抗氧化活性；铁离子还原反应；DPPH自由基；超氧自由基

维吾尔药铁力木为藤黄科(Guttiferae)植物铁力木(MesuaferreaLinn.)的干燥花蕾。其原植物主要分布于在海拔500～600 m的亚热带地区，如：中国云南、广东、广西及印度、斯里兰卡、马来西亚等地[1]。铁力木植物的叶子、花、种子油脂及树皮均可作为印度传统药物的常用药材，在民间主要作为敷剂用于治疗消化不良、发烧、肾脏疾病等，铁力木的花还具有治疗哮喘、咳嗽、发烧等功效[2]。铁力木花蕾为维吾尔医常用药材，维吾尔名为那尔米西克，主治湿寒性或黏液质性疾病，如寒性心虚、抑郁症、神经衰弱、身寒阳痿、湿性胃虚等[3-4]。铁力木还可制成复方制剂，如维药复方“艾比那尔米西克”用于治疗胃脘塞虚、胃纳不佳、腹痛腹胀等[3]。目前，国外已有学者对铁力木花的化学成分及活性进行了研究，从中分离得到萜类、环己二烯类、香豆素类等化合物；还通过预实验确定铁力木花的环己烷和苯提取物中主要有三萜类、树脂；乙醇提取物中富含低聚糖、鞣质和皂苷类成分；而甲醇提取物中也发现有生物碱、糖苷、鞣质、酚类、香豆素、甾体、黄酮、皂苷及挥发油类成分。其甲醇提取物对雌性大鼠具有体外的抗氧化活性和肝保护作用；水提取物具有较强的清除DPPH自由基的活性等[5-9]。但国内对铁力木花的化学成分及活性研究报道较少，艾力克木·吐尔逊等[10]报道了铁力木花的生药学特征及其不同萃取部位抗血小板的聚集作用。因此，为了更好地开发和利用该药材资源，本实验对铁力木花不同极性溶剂的提取物及各萃取部位进行体外抗氧化活性的初步研究，以期为其综合利用和深入开发提供理论依据。

1仪器与试药

1.1药材铁力木药材购于新疆维吾尔自治区维吾尔医院中心药房，经新疆医科大学药学院天药/生药教研室王晓梅副教授鉴定为藤黄科铁力木属植物铁力木(MesuaferreaLinn.)的干燥花蕾(批号:201510301)。

1.2试药DPPH(Sigma)；VC抗坏血酸(南京化学试剂有限公司)；铁氰化钾、邻苯三酚、过氧化氢、硫酸亚铁、邻菲啰啉(郑州市德众化学试剂厂)。上述试剂均为分析纯。

1.3仪器T6新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)； AB104-N电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司，d=0.1 mg)； HH-S4数显恒温水浴锅(金坛市医疗仪器有限公司)；真空干燥箱(DZF-6090型，上海一恒科学仪器公司)；EYELAN-1001旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)。

2方法

2.1铁力木不同极性部位的制备称取0.5 kg的铁力木药材，以乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，浓缩得乙醇提取物。将乙醇提取物水混悬后，依次用石油醚(沸程60～90℃)、乙酸乙酯及正丁醇萃取，得石油醚层，乙酸乙酯层，正丁醇层，水层。另外，将乙醇提取后药渣用水煎煮3次，合并煎煮液，浓缩得水提取物。流程图见图1。

图1　 流程图

2.2抗氧化活性研究

2.2.1Vc溶液的制备精密称取Vc对照品10 mg于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得1 g·L-1的Vc储备液。测定时，吸取适量储备液至10 mL的容量瓶中，配成一系列浓度梯度的Vc溶液。

2.2.2各极性部位溶液的制备精密称取铁力木不同极性部位的浸膏各10 mg，分别置于10 mL的容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得1 g·L-1的不同极性部位的储备液。测定时，吸取适量储备液至10 mL的容量瓶中，配成一系列浓度梯度的供试品溶液。

2.2.3Fe3+还原能力的测定[11]取干净试管若干支，分别依次加入各样品溶液2.5 mL、pH值为6.6的磷酸盐缓冲溶液2.5 mL、1%铁氰化钾溶液2.5 mL，摇匀；将试管置于50℃水浴中保温20 min，取出，快速冷却，分别加入10% 三氯乙酸溶液2.5 mL，摇匀，离心10 min；再分别取上清液2.5 mL，依次加入蒸馏水2.5 mL、0.1% FeCl3溶液0.5 mL，充分混匀，静置10 min，在波长700 nm下测定吸光度值A(以蒸馏水作参比)。吸光度值越大，说明样品对Fe3+的还原能力越强。

2.2.4对DPPH·的清除率的测定[12](1)DPPH·溶液的配制：精密称取DPPH 20 mg于250 mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并定容至刻度，制成0.08 g·L-1的DPPH溶液，0～4℃避光保存。

(2)清除DPPH·能力的测定：分别吸取0.08 g·L-1的DPPH溶液2 mL于试管中，各加系列样品溶液1 mL和甲醇1 mL，混合均匀，在517 nm处测定吸光度值Ai；另取试管，加入3 mL甲醇和各系列样品溶液1 mL，混合均匀，在517 nm处测定吸光度值Aj；另取试管，分别吸取0.08 g·L-1的DPPH溶液2 mL，加入甲醇2 mL，混合均匀，在517 nm处测定吸光度值A0；每组测定三次。DPPH·清除率计算公式如下：清除率(%)=[1-(Ai-Aj)/A0] ×100%。

2.2.5对超氧自由基清除率的测定[13]分别吸取磷酸盐缓冲液(pH=8.2)9 mL与各样品溶液1 mL，混合均匀后于25℃恒温水浴15 min。再分别吸取混合液3 mL，加入45 mmol·L-1邻苯三酚溶液0.1 mL，摇匀，在第4分钟加入10 mol·L-1盐酸1滴终止反应，于325 nm处测定样品吸光值A1；同时分别测定不加邻苯三酚溶液的样品溶液和磷酸盐混合液的吸光值A2和以1 mL溶剂代替样品溶液的磷酸盐和邻苯三酚混合液的吸光值A3，每组重复测定3次。超氧自由基清除率的计算公式如下：清除率(%)=[1-(A1-A2)/A3] ×100%。

3结果

3.1铁力木不同极性部位对Fe3+还原能力的测定还原能力的测定可以评价物质抗氧化活性的强弱。实验中，样品的吸光度值越大，说明样品对Fe3+的还原能力越强。铁力木各极性部位和Vc对Fe3+的还原能力见图2。由实验结果可以看出，铁力木各极性部位和Vc 对Fe3+均表现出一定的还原能力，在实验浓度范围内它们对Fe3+的还原能力呈良好的量效关系，即随着浓度的增加，清除率也逐渐增加。但铁力木各极性部位的作用均弱于Vc。

3.2铁力木不同极性部位清除DPPH·的能力因DPPH·溶液在517 nm处有最大吸收，当样品对DPPH·有清除作用时，其吸光度值下降。因此，样品对DPPH· 的清除能力可以通过比较各溶液吸光度值的变化来评价。铁力木各极性部位和Vc对DPPH·的清除能力如图3所示。由实验结果可以看出，铁力木各极性部位和Vc对DPPH·均表现出一定的清除作用。在实验浓度范围内它们对DPPH·的清除能力呈良好的量效关系，即随着浓度的增加，清除率也逐渐增加。经过计算得各部位的IC50值分别为：Vc(0.06 g·L-1)、水层(0.06 g·L-1)、正丁醇层(0.18 g·L-1)、乙酸乙酯层(1.19 g·L-1)、石油醚层(0.37 g·L-1)、水提物(0.12 g·L-1)、乙醇提取物(0.83 g·L-1)。通过比较各部位的IC50值可知铁力木各极性部位的作用强弱顺序为：水层>水提取物>正丁醇层>石油醚层>乙醇提取物>乙酸乙酯层。其水层对DPPH·具有较强的清除能力，作用相当于Vc。

图2　铁力木提取物和Vc的还原能力

图3　对DPPH·的清除能力

的清除能力

4讨论

体外抗氧化实验结果表明，铁力木不同极性部位均具有一定抗氧化能力，尤其是高浓度的作用明显强于低浓度，从而可以推断铁力木的抗氧化作用与其各部位所含的的化学成分含量有关，含量越高，则其抗氧化活性也就较强。因为本实验为体外实验，并不能完全阐明铁力木的抗氧化作用机制，因此若想把铁力木开发成天然的抗氧化剂，还需对其体内的抗氧化作用机制进行更深入的研究。

参考文献：

[1]中科院《中国植物志》编辑委员会.中国植物志[M]. 北京： 科学出版社,1990:80.

[2]Mazumder R,Dastidar SG,Basu SP,et al.Antibacterial potentiality ofMesuaferreaLinn. flowers [J].Phytother Res,2004,18:824-826.

[3]木提拉·卡日·阿吉,阿不都哈力克·卡日·司马义,艾力·阿吉·库尔班尼亚孜.中国医学百科全书-维吾尔医学分册[M].乌鲁木齐:新疆人民出版社,2009.

[4]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草维吾尔药卷[M].上海：上海科学技术出版社,2005.

[5]Choudhury S,Ahmed R,Barthel A,et al.Volatile oils ofMesuaferrea(L.) [J].Journal of Essential Oil Research,1998,10(5):497-501.

[6]Dennis TJ,Kumar KA,Srimannarayana G.Anew cyclo hexadione fromMesuaferrea[J].Phytochemistry,1988,27(7):2325-2327.

[7]Raju MS,Srimannarayana G,Rao SNV.Structure of mesuanic acid.Indian 196 [J].Journal of Chemistry,1974,12(8):884-886.

[8]Shome U,Mehrotra S,Sharma HP.Pharmacognostic studies on the flower ofMesuaferreaL[J].Plant Sciences,1982,91(3):211-226.

[9]Sahu Alakh N,Hemalatha S,Sairam K.Quality control studies ofMesuaferreaLinn.flowers[J].International Journal of Herbal Medicine,2013,1(2):124-130.

[10] 艾力克木·吐尔逊,热娜·卡斯木,王金辉,等.维药铁力木的生药学特征及其不同萃取部位抗血小板聚集作用研究[J].新疆医科大学学报,2014,37(6):678-681.

[11] 黄莹,程世嘉,李芸达,等.广西壮药薏苡叶甲醇提取物抗氧化活性研究[J].实用药物与临床,2015,18(1):63-65.

[12] 孙晓,郭耀武,刘越,等.秦岭产宜昌蛇菰生药学特征与抗氧化活性研究[J].安徽医药,2015,19(7):1245-1247.

[13] 张慧,章立华,黄琼,等.维药阿育魏实总黄酮抗氧化活性研究[J].安徽农业科学,2014,42(15):4624-4625,4639.

Antioxidant activities of different polarity chemical constituents from Mesua ferrea in vitro

MA Jun-peng1,WANG Xin-lin2,LI Yun3,et al

(1.DepartmentofPharmacy,MidongHospitalofPeople’sHospitalofXinjiangUygurAutonomousRegion,Urumqi,Xinjiang830000,China;2.PharmacyCollege,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi,Xinjiang830011,China;3.DepartmentofPharmacy,theFifthDivisionHospitalofXinjiangProductionandConstructionCorps,Bole,Xinjiang833400,China)

Abstract:Objective To study the antioxidant activity of the different polarity chemical constituents from the buds of Mesua ferrea. Methods The capacity of ferric reducing antioxidant power and scavenging of the ethanol total extract,water extract,petroleum ether fraction，ethylacetate fraction，n-butanol fraction and water fraction from the buds of Mesua ferrea were evaluated by Fe(3+) reduction capacity experiments and scavenging assay in vitro at different concentrations．The results were compared with those of positive control vitamin C (VC)．Results The ferric reducing antioxidant power and scavenging activity of different polarity chemical constituents from the buds of Mesua ferrea were weaker than those of VC. Among them,the water fraction and n-butanol fraction exhibited strong reduction power of Fe(3+). The water extract and water fraction demonstrated strong scavenging activities of DPPH·. The petroleum ether fraction and water extract demonstrated the strong scavenging activities of . Conclusions Mesua ferrea has a strong antioxidant activity.

Key words:Mesua ferrea;antioxidant activity;ferric reducing antioxidant

(收稿日期：2015-10-19，修回日期：2015-12-07)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.03.004

通信作者：王晓梅，女，副教授，研究方向：天然药物活性成分的研究与开发，E-mail：forever.wxm@163.com

基金项目：国家“十二五”科技支撑计划(No 2012BAI30B02)