氨酚曲马多口腔崩解片中有关物质的HPLC测定

包志鹏

摘 要：目的：建立高效液相色谱法，并对氨酚曲马多口腔崩解片中的已知杂质和未知杂质进行精准测定。方法：采用BDS-C18柱来进行有关物质测定，以醋酸-醋酸钠缓冲液-甲醇为流动相A，以甲醇为流动相B，严格遵照实验程序梯度来进行洗脱，实验检测波长为271nm，流速为1.0mL/min。结果：实验研究表明，各种杂质都呈现较好的分离状态，氨基酚和顺式盐酸曲马多的最低检测率满足实验标准，平均回收率普遍在99.5%以上。结论：采用HPLC法来对氨酚曲马多口腔崩解片中的有关物质进行测定，具有良好的应用效果，并且具有一定的便捷性和准确性，值得加以推广应用。

关键词：氨酚曲马多口腔崩解片；对乙酰氨基酚；对氨基酚；高效液相色谱法；有关物质

对乙酰氨基酚属于苯胺类解热镇痛药物，其半衰期大多在1-4小时之间。盐酸曲马多属于合成阿片类的中枢性镇痛药，减小较快，实际镇痛时间能够持续5小时左右。国外市售的氨酚曲马多片即是由对乙酰氨基酚和盐酸曲马多的相互配合所制成的，在中度和重度急性疼痛中得到比较广泛的应用，尤其是术后疼痛和晚期癌性疼痛的之来哦，具有良好的镇痛效果。临床实验研究显示，此种复方制剂的镇痛效果较强，与同等剂量的单独组分相比，见效快且维持时间长。实验研究表明，HPLC测定方式具有一定的精准性和高效性，能够对氨酚曲马多口腔崩解片中的已知杂质对氨基酚、顺式盐酸勿骂多和其他类型的未知杂质进行同时检测，从而在保证检测效果的基础上，提高了有关物质测定的简便性和准确性。

1 仪器与试药

在本次实验研究中，主要选用标准规格的高效液相色谱仪来进行实验，确保甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。试药方面，确保对乙酰氨基酚对照品和盐酸曲马多对照品的质量满足实验的实际药品要求，对氨基酚对照品的含量应当在95%以上，顺式盐酸曲马多对照品选自中国药品生物制品检定所，氨酚曲马多口腔崩解片是研究人员自制而成的。

2 方法与结果

2.1 制备溶液

供试品溶液的制备过程中，取适量样品进行研磨，至细粉末状态后进行精密称取，置于50mL的容量瓶中，加入流动相A，在超声环境下对其进行溶解处理，稀释至刻度后进行摇匀和过滤，去适量滤液作为供试品溶液。

对照品溶液的制备过程中，精密称取适量氨基酚对照品后，加入流动相A制成标准含量的溶液，作为对照品溶液1；另外精密称取顺式盐酸曲马多对照品适量后，同样加入流动相A制成标准含量的对照品溶液2。在此基础上，精密称取供试品溶液、对照品溶液1各1mL，对照品溶液2取3mL，将三者之于统一100mL容量瓶中，加入流动相A进行稀释，作为对照溶液。

2.2 色谱条件及测定方法

在本次实验研究中，采用采用BDS-C18色谱柱来进行实验，并以以醋酸-醋酸钠缓冲液-甲醇为流动相A，以甲醇为流动相B，严格遵照实验程序梯度来进行洗脱。测定方法上，取适量对照溶液注入到液相色谱仪中，并结合实验的实际情况来对其灵敏度进行调节，确保对乙酰氨基酚的峰高满足实验满量程的80%，在此基础上取适量供试品溶液注入到液相色谱仪中，对色谱图内盐酸曲马多的保留时间进行精准的记录。相关实验研究人员应当注意的是，供试品溶液的色谱图中若有对氨基酚和顺式盐酸曲马多保留时间爱你相一致的色谱峰，应当对其面积进行合理化控制，应当小于对照品溶液中相应的峰面积，并保证其他杂质峰面积的和在对照溶液主峰面积之和。

表1 梯度洗脱程序表

2.3 专属性实验

2.3.1 各杂质的分离。精密量取对照溶液及对照品与供试品混合溶液各适量，按上述色谱条件分别进样，结果见图1。各己知物质与相邻峰均基线分离，理论板数均不低于2000。辅料对测定无干扰。

2.3.2 破坏性试验。精密称取样品研细粉末适量（约相当于盐酸曲马多37.Smg），置50mL量瓶中，共称5份，分别经过高温、光照、强酸、强碱、强氧化等条件破坏后，照供试品溶液制备方法处理，按色谱条件进样分析，结果见图2。各破坏条件下的降解产物与主成分峰均有良好的分离度。

3 讨论与结论

3.1 检测波长的选取。实验研究显示，检测波长的选取，应当分别取适量已知物质对招聘适量，加入流动相A进行溶解后，在标准波长范围内对其进行扫描，对乙酰氨基酚、盐酸曲马多以及对氨基酚等的最大吸收波长详细结果见图3。通过观察和分析可知，样品中盐酸曲马多的量较少，并且其最大吸收波长与已知杂质对氨基酚和顺式盐酸曲马多比较接近，在此种情况下，为了更好的提高盐酸曲马多以及其有关杂质的实际检测灵敏度，应当以271nm为检测波长，以保证实验研究的精准性和可靠性。

3.2 色谱柱的选择从文献来看，对乙酸氨基酚和盐酸曲马多的色谱分析都采用C18柱。但经试验发现，对乙酸氨基酚和盐酸曲马多在不同品牌C18柱中的保留行为有很大的差异。曾采用Zorbax C18和HypersilODS柱进行分析，前者对乙酰氨基酚和盐酸曲马多都有拖尾现象，理论塔板数也不够理想，后者对乙酸氨基酚峰形有了很大改善，盐酸曲马多拖尾却更严重。可能是分析物与C18柱硅胶担体表面的残余硅经基发生了相互作用，使样品峰形极差，拖尾严重，这样会导致一些小峰埋没于前一拖尾峰的尾巴中，对杂质检查非常不利。因此尝试使用BDS-C18柱，BDS硅胶担体键合前经过专门的碱钝化处理，将残余硅轻基降至极限，可以大大降低硅轻基与分析物之间的相互作用，改善色谱峰形。

3.3 流动相的选择

曾参照BP 2002收录的盐酸曲马多有关物质检查方法配制流动相：但经测定，该流动相pH值小于2，对一般色谱柱损伤较大。后参照中国药典2005版收录的盐酸曲马多片有关物质检查191流动相：醋酸一醋酸钠缓冲液（pH4.5）一甲醇（65：35）。但该色谱条件下，对乙酰氨基酚与相邻杂质峰的分离度不佳，因此尝试将流动相中甲醇比例逐渐降低。当缓冲液与甲醇比例达80：20时，对乙酸氨基酚与相邻杂质的分离度符合要求，但盐酸曲马多保留时间太长（约45min），峰对称性较差，检测灵敏度降低。为了使对乙酸氨基酚和盐酸曲马多都得到理想的保留时间和分离度，使用梯度洗脱作为流动相系统，结果令人满意。■

参考文献

[1]胡玉庆.氨酚曲马多片的有关物质方法学研究[D].黑龙江医学，2014.

[2]刘小均，罗军波，李培海.RP-HPLC加校正因子的主成分自身对照法测定盐酸多奈哌齐口腔崩解片中有关物质的含量[J].中国药房，2015.