Kindlin—2与VEGF—C蛋白在胃癌组织中的表达及意义

刘鑫　辛瑞　刘鲁英

【摘 要】目的：检测胃癌组织中Kindlin-2与VEGF-C蛋白的表达，探讨二者在胃癌发生发展中的作用。方法：选取109例胃癌组织标本为研究对象，采用免疫组织化学染色方法检测Kindlin-2与VEGF-C的表达。结果：Kindlin-2在54.1%的胃癌组织中表达，与肿瘤TNM分期和淋巴结转移密切相关，并发现Kindlin-2表达与VEGF-C表达在胃癌组织中呈正相关（P<0.05）。结论：Kindlin-2和VEGF-C可能在胃癌细胞侵袭过程中协同发挥作用。

【关键词】胃癌；Kindlin-2；VEGF-C；免疫组织化学染色

The expression and significance of Kindlin-2 and VEGF-C in gastric carcinoma

LIU Xin XIN Rui LIU Lu-ying

（Department of Pathology， Binzhou Medical University， Yantai Shandong 264003， China）

【Abstract】Objective：to detect the expression of Kindlin-2 and VEGF-C in gastric cancinoma and explore the role of the two proteins in the progression of gastric cancer. Methods： 109 cases of gastric carcinoma were selected as the research object. The expression of Kindlin-2 and VEGF-C were detected by immunohistochemical staining. Result： Kindlin-2 expressed in 54.1% of gastric cancer tissue， and it is closely related to the tumor TNM stage and lymph node metastasis。We also found that Kindlin-2 expression were positively correlated with the expression of VEGF-C in the tissue of gastric cancer（P<0.05）. Kindlin-2 and VEGF-C may have coordinated role in the procession of gastric cancer cell invasion.

【Key words】Gastric cancer； Kindlin-2； VEGF-C； Immunohistochemistry

胃癌起病隐匿，诊断时往往已经是晚期，因此，5年生存率较低，是危害人类健康的重要疾病。Kindlin-2属于黏着斑蛋白（vinculin），在人类乳腺癌、前列腺癌中发现Kindlin-2与肿瘤的侵袭有关[1-2]。VEGF-C是VEGF家族成员之一，因其能调节淋巴管的发育、参与肿瘤淋巴道转移、促进新生血管生成而备受关注。本研究通过免疫组织化学染色检测Kindlin-2与VEGF-C在胃癌组织中表达及其相关关系，探讨Kindlin-2在胃癌侵袭等生物学行为中的作用及机制。

1 材料与方法

1.1 材料

收集109例在我院接受胃癌根治手术并有完善病理资料的病例，其中，男性76例、女性33例，男女比例为2.3：1；年龄<60岁的58例，≥60岁的51例。根据国际抗癌联盟制定的标准进行TNM分期，I期18例、II期20例、III期38例、IV期33例；所选择的患者术前均未行任何形式的辅助治疗。所有标本均经病理证实，采用10%福尔马林液固定，石蜡包埋切片备用。

1.2 主要试剂及方法

兔抗人Kindlin-2多克隆抗体购自Abcam公司，兔抗人VEGF-C多克隆抗体购自Zymed公司，EnVision免疫染色试剂盒购自Dako公司。

切片常规脱蜡水化，封闭内源性过氧化物酶，抗原修复，加入一抗工作液，加入二抗，DAB显色，苏木素复染，脱水、透明、封片。PBS取代一抗作空白对照。

1.3 结果判读

细胞质内出现淡黄色细颗粒、棕黄色颗粒或棕褐色粗颗粒即判断为阳性表达。显色强度以多数细胞呈现的染色特征为标准，根据着色（颜色）无、弱（淡黄）、中（棕黄）、强（棕褐）分别计分为0、1、2、3分；阳性细胞数≤5%、6%-25%、26%-50%、51%-75%、≥75%分别计分0、1、2、3、4分。免疫反应评分=显色强度×阳性细胞百分率。判定阳性结果：得分0～4分为低表达，5～12分为高表达。

1.4 统计学处理

采用SPSS19.0数据分析软件进行统计学处理，样本率之间比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析进行，P<0.05代表检验结果具有统计学意义。

2 结果

2.1 Kindlin-2蛋白在胃癌组织中的表达

Kindlin-2蛋白免疫组化显色为黄色或棕黄色，弥漫分布于细胞质中。Kindlin-2高表达者59例（54.1%）、低表达者50例（45.9%）。

2.2 VEGF-C蛋白在胃癌组织中的表达

VEGF-C蛋白免疫组化染色呈棕黄色或棕褐色，分布于胃癌细胞胞浆内，肿瘤间质中少量存在。109例胃癌标本中，42例表达（38.5%）、67例不表达（61.5%）。

2.3 Kindlin-2在胃癌组织中表达的临床意义及其与CTGF表达的相关性

Kindlin-2在胃癌组织中的表达随着TNM分期的升高明显增强（P=0.014），并且在发生淋巴结转移的病例中胃癌组织表达Kindlin-2显著强于未发生淋巴结转移的病例（P=0.014）。Kindlin-2在胃癌组织中的表达与胃癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、Lauren分型、脉管癌栓和远处转移等都没有显著相关性。见表1。

胃癌组织中Kindlin-2蛋白表达与CTGF蛋白表达显著相关（P=0.004）。见表2。

表1 Kindlin-2蛋白表达与胃癌临床病理特征之间的关系

表2 Kindlin-2蛋白表达与VEGF-C表达之间的关系

3 讨论

Kindlin-2是新近发现的黏着斑蛋白，通过与整合素β亚基胞质尾区高亲和力的结合位点结合，调控整合素活化与细胞骨架重排，参与机体多种重要的生理功能和病理过程。目前，Kindlin-2与临床疾病的关系认知较少，Kindlin-2异常不直接导致特定的遗传性疾病可能与其具有胚胎致死性有关。但Kindlin-2在心血管系统的发育及新生血管的形成[2]及肿瘤的侵袭[3]过程中有着潜在且不可忽视的重要性。Kindlin-2在恶性黑色素瘤和胸膜肺癌转移瘤中高表达并参与肿瘤的侵袭转移[4]。本研究通过免疫组织化学染色方法检测Kindlin-2蛋白在胃癌组织中的表达，Kindlin-2高表达者59例（54.1%），Kindlin-2在胃癌组织中的表达随着TNM分期的升高明显增强（P=0.014），并且在发生淋巴结转移的病例中胃癌组织表达Kindlin-2显著强于未发生淋巴结转移的病例（P=0.014）。

VEGF-C属于血管内皮生长因子（VEGF）家族[5]，Cao[6]等测定VEGF-C对血管和淋巴管的诱导情况，结果表明VEGF-C能诱导几乎等量的血管和淋巴管生成。Kindlin-2是细胞间紧密连接的重要组成部分，作为一种信号衔接蛋白参与VEGF-C对血管通透性的调节作用。作用机制可能为：VEGF-C可以促进Kindlin-2的酪氨酸磷酸化，加强肿瘤血管对大分子物质的渗透作用。本研究发现胃癌中Kindlin-2的表达与VEGF-C呈正相关，表明Kindlin-2与VEGF-C相互作用，共同参与胃癌的发生发展。

目前，胃癌的临床治疗方式单一，生物治疗现状也不令人满意，由于缺乏特异及高效的生物治疗靶点，现有的临床病理指标不足以支持胃癌的个体化治疗。高表达的Kindlin-2和VEGF-C可能与胃癌细胞的侵袭转移等恶性生物学行为相关。深入研究胃癌的侵袭、转移过程中可能涉及的分子机制将有助于我们发现胃癌转移的诊断标志物，对设计新的治疗胃癌的方法和寻求治疗靶点有重要的意义。

【参考文献】

[1]Sin S，Bonin F， Petit V， et al. Role of the focal adhesion protein kindlin-1 in breast cancer growth and lung metastasis[J].J Natl Cancer Inst，2011，103（17）：1323-1337.

[2]Gong X， An Z， Wang Y， et al. Kindlin-2 controls sensitivity of prostate cancer cells to cisplatin-induced cell death[J].Cancer Lett，2010，299（1）：54-62.

[3]Shen Z， Ye Y， Dong L， et al. Kindlin-2：a noval adhesion protein related to tumor invasion， lymph node metastasis， and patient outcome in gastric cancer[J].Am J Surg，2012，203（2）：222-9.

[4]An Z， Dobra K， Lock J G， et al. Kindlin-2 is expressed in malignant mesothelioma and is requiret for tumor cell adhesion and migration[J].Int J Cancer，2010，127（9）：1999-2008.

[5]段泽星，谢立群，等.VEGF在肿瘤生长和血管生成中的作用[J].世界华人消化杂志，2010，18（27）：2894-2900.

[6]Cao R， Eriksson A， Kubo H， Alitalo K， Cao Y， Thyberg J. Comparative evaluation of FGF-2， VEGF-A， and VEGF-C-induced angiogenesis， lymphangiogenesis， vascular fenestrations， and permeability[J].Circ Res，2004，94：664-670.

[责任编辑：王楠]