MicroRNA-218下调肝细胞癌中的E2F2基因表达抑制细胞增殖的研究

王涛　马思聪　戚星星　汤晓寅　崔丹　王智　池嘉昌　李萍　翟博

200127　上海交通大学医学院附属仁济医院肿瘤介入科



·论著·

MicroRNA-218下调肝细胞癌中的E2F2基因表达抑制细胞增殖的研究

王涛马思聪戚星星汤晓寅崔丹王智池嘉昌李萍翟博

200127上海交通大学医学院附属仁济医院肿瘤介入科

【摘要】目的探讨MicroRNA-218(miRNA-218)下调肝细胞癌中的E2F2基因表达，从而抑制细胞增殖的机制。方法从细胞库中取得人类肝癌细胞株HepG2、Huh7、MHCC-97H、BEL-7402和正常肝细胞株L02。随后进行细胞培养和转移、反转录多聚酶链反应、免疫印迹分析、细胞增殖和集落形成试验、细胞周期分析和相应的统计学处理。结果miR-218表达水平在癌细胞中下调。MTT生长曲线表明,当miR-218过度表达时(Huh7中的miR-218 P=0.001;在 MHCC-97中的miR-218 P=0.013)细胞增殖能力明显降低。双荧光素酶实验证实，转染了miRNA-218模拟物的细胞的荧光素酶活性显著降低(P<0.01)，荧光酶报告基因含有E2F2野生型的第3′非翻译区。这些结果表明E2F2是 miR-218的直接作用对象。与阴性对照组相比,转染了miR-218 模拟物的Huh7和 MHCC-97细胞株中的E2F2的相对mRNA表达显著下调(P<0.05)。结论miR-218通过直接作用于E2F2基因的第3′非翻译区调节E2F2的表达，从而抑制HCC细胞增殖。

【关键词】MicroRNA-218；肝细胞癌；E2F2基因；细胞增殖

MicroRNAs(miRNAs)可以有效调节各种生物过程,包括细胞增殖、迁移、分化和细胞凋亡。研究表明，miRNAs的调节异常与各种类型人类癌症的发生和发展密切相关，而miR-218与肿瘤发病机制和各种类型癌症的形成相关[1-2]。miR-218的表达下调,可能作为细胞瘤、透明细胞性肾细胞癌和胃癌、鼻咽癌、宫颈癌、乳腺癌、口腔癌和小细胞肺癌的一种潜在的肿瘤抑制剂[3]。目前的研究都是基于假设与正常肝细胞相比，miR-218在肝癌细胞中表达下调,从而诱导细胞周期阻滞于G0/G1期检查点，恢复miR-218可抑制细胞增殖[4]。本研究将在此基础上进一步分析，旨在提供较为直接依据表明miR-218作用于E2F2来调节其在肝癌细胞中的表达。……