人SND1基因慢病毒载体构建及稳定表达SND1蛋白的人卵巢癌SKOV3细胞株筛选

任媛媛，雷静，赵然，辛灵彪，苏超，高星杰，杨洁

(天津医科大学,天津300070)

·论著·

人SND1基因慢病毒载体构建及稳定表达SND1蛋白的人卵巢癌SKOV3细胞株筛选

任媛媛，雷静，赵然，辛灵彪，苏超，高星杰，杨洁

(天津医科大学,天津300070)

目的 构建人SND1基因慢病毒载体，筛选稳定表达SND1蛋白的人卵巢癌SKOV3细胞株，为探讨SND1基因对卵巢癌的调控作用提供细胞系模型。方法 采用PCR法从pCMV-FLAG-SND1质粒中扩增FLAG-SND1基因片段，连接到慢病毒载体表达质粒pLVX-IRES-Hyg中，获得重组慢病毒载体pLVX-FLAG-SND1。以pLVX-FLAG-SND1瞬时转染293T细胞48 h，采用Western blotting法检测SND1蛋白表达量。pLVX-FLAG-SND1重组质粒通过与包装质粒共转染293T细胞，获得携带FLAG-SND1的重组慢病毒。以慢病毒感染SKOV3细胞48 h，在细胞培养基中加入1 μg/mL 潮霉素B，筛选稳定表达SND1蛋白的细胞株，采用Western blotting法检测该细胞株内SND1蛋白表达量。结果 重组慢病毒载体经双酶切和基因测序比对鉴定正确。重组慢病毒载体在瞬时转染的293T细胞中SND1蛋白表达量高于野生型SKOV3细胞(P<0.01)。SKOV3细胞经慢病毒感染、药物筛选后获得的稳定表达株中SND1蛋白表达量高于野生型SKOV3细胞(P<0.01)。结论 成功构建了SND1基因慢病毒载体pLVX-FLAG-SND1，并筛选出稳定表达SND1蛋白的SKOV3细胞株，为进一步明确卵巢癌发生、发展机制奠定了基础。

SND1基因；慢病毒载体；SKOV3细胞；卵巢癌

人类SND1蛋白又称p100或Tudor-SN，是一种在真核细胞中广泛表达、偶联转录调控和剪接的多功能蛋白，参与基因转录、RNA干扰、pre-mRNA剪切等多种生物学过程，在细胞增殖、凋亡、应激及脂肪代谢等多种生理过程中发挥重要调控作用[1～4]。SND1蛋白在乳腺癌、肺癌、肝癌、结肠癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤中发挥促癌作用，其过表达可能是导致恶性肿瘤发生、发展的重要原因[5～7]。但SND1与卵巢癌发生、发展的关系尚不明确。2015年8～12月，本研究构建了SND1基因慢病毒载体，包装病毒后感染并筛选稳定表达SND1蛋白的人卵巢癌SKOV3细胞株，为进一步探讨SND1在卵巢癌中的作用提供体外细胞系模型。……