慢病毒介导干扰LSD1基因的卵巢癌稳转细胞株的构建及鉴定

万晓蕾 ，赖文升，邵根宝，李袁霞，刘秀雯，金洁，吴朝阳

(1江苏大学附属人民医院，江苏镇江212002；2江苏大学医学院)

慢病毒介导干扰LSD1基因的卵巢癌稳转细胞株的构建及鉴定

万晓蕾1，2，赖文升2，邵根宝2，李袁霞2，刘秀雯2，金洁2，吴朝阳1

(1江苏大学附属人民医院，江苏镇江212002；2江苏大学医学院)

目的 构建并鉴定慢病毒介导干扰赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)基因的卵巢癌稳转细胞株，为深入研究以LSD1为靶点的表观遗传学抗肿瘤治疗奠定基础。方法 扩增并抽提所需质粒，紫外分光光度计检测质粒纯度，计算A260/A280。采用Lipofectamine 2000脂质体转染法将质粒转染入人肾上皮细胞293T，取转染THM质粒后的293T细胞，在倒置荧光显微镜下观察转染情况；分别取转染目的质粒和PLKO空载体质粒后的293T细胞，收集病毒上清液，感染人卵巢癌SKOV3细胞(分别记为观察组和对照组)，筛选出稳转细胞株。观察组经浓度梯度(0、1、10、100、1 000 ng/mL)多西环素诱导，以及两组均经100 ng/mL多西环素诱导后，采用Western blotting法检测LSD1及其特异性反应底物H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量。结果 目的质粒A260/A280在2.0左右，说明纯度较高；THM质粒转染293T细胞呈绿色荧光，为真核载体表达的绿色荧光蛋白，表明成功转染。随着多西环素浓度的升高，观察组诱导后LSD1蛋白相对表达量均逐渐降低，H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量逐渐升高，各浓度间比较有统计学差异(P均<0.01)。观察组经100 ng/mL多西环素诱导后LSD1蛋白相对表达量均明显低于同组诱导前及对照组诱导后，H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量明显高于同组诱导前及对照组诱导后(P均<0.01)。 结论 成功构建慢病毒干扰下调LSD1基因表达的卵巢癌稳转细胞株，并经不同浓度多西环素诱导鉴定；该细胞株可用于以LSD1为靶点的表观遗传学抗肿瘤治疗研究。

赖氨酸特异性去甲基化酶1；RNA干扰；人卵巢癌SKOV3细胞；稳转细胞株

研究证实，细胞表观遗传学异常，如DNA甲基化、组蛋白修饰等在卵巢癌的发生、发展中具有重要作用[1，2]。赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)是第一个被发现的组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶，特异性作用于组蛋白H3第4位赖氨酸位点，催化移除一甲基团和二甲基团[3，4]。……