肝内胆管细胞癌相关成纤维细胞的分离、纯化及鉴定

杨柳晓， 高　强

1.复旦大学附属中山医院重症医学科, 上海　200032 2.复旦大学附属中山医院肝外科, 上海　200032



·论著·

肝内胆管细胞癌相关成纤维细胞的分离、纯化及鉴定

杨柳晓1， 高强2*

1.复旦大学附属中山医院重症医学科, 上海200032 2.复旦大学附属中山医院肝外科, 上海200032

[摘要]目的： 探讨肝内胆管癌相关成纤维细胞(iCAFs)的分离、纯化和鉴定方法，为后续研究奠定基础。方法： 在无菌条件下，留取肝内胆管细胞癌(iCCA)组织标本，充分剪碎后置入含Ⅳ型胶原酶和透明质酸酶的消化液中恒温振荡，将所得的单细胞悬液进行免疫磁珠分选纯化，分离出肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)并培养。通过观察细胞形态，并经免疫荧光和流式细胞仪测定，鉴定其是否为iCAFs。结果： iCAFs呈长条形或纺锤形，胞质透明，折光明显，胞核单个、呈圆形或卵圆形, 细胞突起相互交错重叠形成网格状排列、密集时呈现 “峰-谷”样表现；免疫荧光检测显示，α平滑肌肌动蛋白(+)、波形蛋白(+)、复合型角蛋白抗体(-)；流式细胞仪检测示，α平滑肌肌动蛋白(+)，同时CD34和CD45均为(-)。结论： 酶消化法联合免疫磁珠分选可有效分离出高纯度的iCAFs，为进一步研究iCAFs的相关功能研究提供了良好的平台。

[关键词]肝内胆管细胞癌；肿瘤相关成纤维细胞；分离；鉴定

肿瘤微环境中的成纤维细胞被活化后可以通过自分泌和(或)旁分泌途径为上皮提供促癌信号、参与肿瘤血管的形成，促进肿瘤侵袭转移[1]。这类具有特殊表型及功能、存在于肿瘤间质中的成纤维细胞群即被称为肿瘤相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts, CAFs)。……