含人干细胞白血病基因慢病毒载体转染Cajal样间质细胞的效果研究

于建超，王勤章，王江平，钱 彪，李应龙，王新敏，倪 钊，李 强

·论著·

含人干细胞白血病基因慢病毒载体转染Cajal样间质细胞的效果研究

于建超，王勤章，王江平，钱 彪，李应龙，王新敏，倪 钊，李 强

832000 新疆石河子市，石河子大学医学院附属第一医院泌尿外科

【摘要】目的观察携带增强绿色荧光蛋白(GFP)的含人干细胞白血病(SCL)基因慢病毒载体转染体外培养的豚鼠膀胱Cajal样间质细胞(ICC)的效果。方法2014年10月—2015年8月，选取普通级成年健康豚鼠16只。构建含人SCL基因的慢病毒载体，并标定病毒滴度；采用随机数字表法选取健康豚鼠4只，采用颈椎脱臼方法将其杀死，体外培养豚鼠膀胱ICC。设置不同感染复数(MOI)(0.5、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0)，利用含人SCL基因的慢病毒载体转染ICC，在激光共聚焦显微镜下观察ICC生长状态并计算转染效率，确定最佳MOI。采用随机数字表法将ICC分为正常对照组、空白质粒对照组与慢病毒转染组，其中正常对照组加入1%磷酸盐缓冲液(PBS)，空白质粒对照组加入空慢病毒，慢病毒转染组按最佳MOI加入含人SCL基因的慢病毒载体，计算各组转染效率，确定最佳转染时间。采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测SCL mRNA表达情况。上述实验均独立重复4次。结果经测定，病毒滴度为5×108 TU/ml。倒置显微镜下发现一些特征性梭形细胞，其两侧有显著外凸分枝，细胞核较大，其外形规则，有序地实现细胞贴壁，而其他未贴壁细胞则呈现与ICC不一样的形态，胞体多为椭圆形，细胞两极无突起，整体形状扁平。激光共聚焦显微镜下可以发现酪氨酸蛋白激酶生长因子受体(c-kit)受体成功表达，证实培养的细胞是膀胱ICC。……