日本乙型脑炎病毒对猪外周血单核细胞炎性因子mRNA转录时相影响的研究

何潇湘，景亚星，靳晓慧，兰培英，张利卫，周 雍，魏战勇，

猪日本乙型脑炎(Porcine Japanese Encephalitis B)是由日本乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus，JEV)引起的，主要依靠吸血的雌蚊为传播媒介而进行传播的一种严重侵害中枢神经系统的急性人兽共患的传染病。JEV的危害较大，可感染很多动物和人，对猪的危害最为严重［1－2］。该病毒可引起母猪发生毒血症、子宫内膜炎;怀孕母猪发生流产、死胎、畸形胎、木乃伊胎等繁殖障碍［3］;公猪发生单侧性睾丸炎，严重影响着养猪业的发展［4－5］。有关JEV感染引起猪的相关疾病的发病机制和免疫病理学研究尚不深入，这严重制约了新型疫苗、有效药物的研发和疾病防控。猪外周血单核细胞(Porcine Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC)是机体重要的免疫细胞，能分泌白介素、干扰素、集落刺激因子等细胞因子，在免疫应答过程中，细胞因子对细胞间的相互作用、细胞的生长和分化具有重要的作用，研究细胞因子的转录对研究并揭示猪炎症反应和免疫应答的激发与调控有着重要作用［6］。罗线连等［7］研究发现，JEV 感染猪PBMC 后可引起 MHC-Ⅰ、Mx1、2’，5’寡腺苷酸合成酶(2-5OAS)、转录因子IRF3等抗病毒相关因子增加，为研究细胞抗病毒机制奠定基础。但对于JEV促炎性反应，特别是对于促炎因子的研究较少。本试验利用相对荧光定量PCR方法，分析不同时间点，JEV感染PBMC后的促炎性细胞因子(IL-8、IL-12、IL-17、IL-18)mRNA 的表达，为探讨JEV免疫致病机制提供依据。

1 材料与方法

1.1 病毒和细胞

猪日本乙脑病毒标准毒株购自中国兽药监察所，经河南省动物性食品安全重点实验室传代保存，病毒在PK-15细胞上传代10代，测定病毒滴度为104.5TCID50·mL－1。……