猪β防御素2胁迫下大肠杆菌内参基因的稳定性分析

张 坤，张 恒，于志明，陈锐博，郑振宇，李春丽

实时荧光定量PCR已成为分析基因表达水平的常用方法，该方法具有灵敏度高、操作简便，重复性好等优点［1］。在实际研究中，基因表达的分析结果易受很多因素的影响，通常需要内参基因进行校正，以得到均一化的结果。常用的内参基因一般为管家基因(Houseking genes)。理想的管家基因应该在不同组织、不同细胞、不同时间阶段及其不同实验条件下，都能稳定表达的基因。研究表明，目前没有一种管家基因可以在任何条件下都表达恒定，在不同的组织中或者不同条件下，其表达是有变化的［2－3］。以不同的管家基因作为内参会得到完全不同的结果，表达量会相差几倍，几十倍，甚至高达上百倍［4－6］。盲目地选择一个管家基因做内参，甚至可能得出错误的结论［7－9］。因此，利用RT-qPCR技术来研究基因表达时，需要根据试验对象及条件选择合适的内参基因进行校正分析，以得到相对真实可信的结果。对于在不同条件下内参基因的筛选已经有很多报道，但是多集中在植物和动物方面，对微生物，尤其是大肠杆菌内参基因的报道较少［10－12］。大肠杆菌是引起人类和动物感染和食物中毒最常见的病原菌之一，大肠杆菌引起的疾病如仔猪的黄白痢等长期困扰着养殖业的发展，并且其抗药性越来越严重，使得本来可以医治的疾病变得无药可医。猪的发病率、死亡率居高不下，极大地制约了养猪业的健康发展，同时，也严重地威胁着人类的健康［13－15］。……