NT-proBNP特异性单克隆抗体的制备及鉴定

刘鹏展黄绮玲何小维李文美，张文琪张赛

（1. 华南理工大学食品科学与工程学院，广州 510640；2. 广州万孚生物技术股份有限公司，广州 510663）

NT-proBNP特异性单克隆抗体的制备及鉴定

刘鹏展1黄绮玲2何小维1李文美1，2张文琪1张赛2

（1. 华南理工大学食品科学与工程学院，广州 510640；2. 广州万孚生物技术股份有限公司，广州 510663）

旨在制备并鉴定抗人NT-proBNP特异性单克隆抗体。采用重组NT-proBNP蛋白免疫Balb/c小鼠，取血清效价高的脾细胞与SP2/0细胞融合，经HAT筛选和有限稀释法亚克隆，获得阳性杂交瘤细胞株，用动物体内诱生法制备腹水，用正辛酸-硫酸铵沉淀法将抗体纯化，并测定抗体的亚类、效价、特异性及相对亲和力。结果表明，获得4株能稳定分泌抗人NT-proBNP单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株，分别命名为1G12、1B2、3D5和2D11。抗体Ig亚类，1G12和1B2为IgG2a型，2D11为IgG1型，3D5为IgG2b型；1G12，1B2和3D5的抗体效价达到106，而2D11的效价仅达104。特异性好，1G12、1B2、3D5和2D11四株抗体的亲和常数依次为9.32×1011、1.07×1012、2.31×1012和6.33×1010。成功制备了特异性抗人NT-proBNP单克隆抗体。

NT-proBNP；单克隆抗体；间接ELISA法

N末端B型钠尿肽原（NT-proBNP）是心肌细胞在合成多肽类激素B型钠尿肽（BNP）的过程中所产生无生物活性的直链多肽片段［1］。当负荷引起心室压力变化以及室壁张力的增加时，心室肌细胞就会合成和分泌NT-proBNP，因此NT-proBNP浓度的升高可以很好地反映心室结构和功能的改变，以及心脏有无损伤及损伤程度［2］。目前，NT-proBNP已被公认为心功能紊乱最敏感和最特异的指标，是诊断心力衰竭的一个具有划时代意义的客观标志物［3］。

目前国际上检测人NT-proBNP常用的是免疫学方法，主要为NT-proBNP快速诊断试剂，其类型包括多克隆抗体和特异性强、灵敏度高的单克隆抗体。……