益智安神口服液提取工艺研究

伍文彬，谢淑玲，雷鸣1,，张廷模，张文文

·炮制制剂·

益智安神口服液提取工艺研究

伍文彬1,2*，谢淑玲2，雷鸣1,2，张廷模2，张文文3

目的：优选益智安神口服液的提取工艺。方法：以栀子苷含量和固含物的综合评分为考察指标，以挥发油提取量为考察因素设计单因素试验，以溶媒量、提取时间、提取次数等3个因素设计L9(34)正交试验优选益智安神口服液提取工艺。结果：最优工艺为益智、郁金、川芎药材加6倍量水，提取4 h，收集挥发油。再将药渣与三七、栀子等药材用10倍药材量的水提取2次，每次2 h。3批样品验证试验的栀子苷提取量平均为3313.90 mg，RSD=2.10%（n=3），固含物总量平均为73.12 g，RSD=2.36%（n=3）。结论：按照研究的优选工艺参数能够生产出合格的产品，且样品性质稳定，本研究工艺可作为益智安神口服液的制备工艺。

益智安神口服液；制备工艺；栀子苷；固含物；单因素试验；正交试验

益智安神口服液为成都中医药大学附属医院老年病科多年临床使用经验方，由益智、三七、川芎、郁金、栀子等组成，具有补肾安神、开郁逐痰、活血通络之功效，临床疗效确切，主要用于年老体虚、久病耗损等引起的神情淡漠、智能减退、反应迟钝、善忘、腰膝酸软、痰多吐涎、面色晦暗或口唇爪甲青紫、甚则二便失禁，舌暗，脉涩等，属于轻度认知障碍、阿尔茨海默病见以上表现者。由于本方临床服用采用传统水煎煮的方法，存在携带不便、服药量较大、口感不佳等缺点，且制备工艺不一、质量控制缺乏，严重影响该品种在临床中广泛使用。本研究在保障有效性的基础上，采用现代制剂技术，将其制成安全有效、质量可控、服用方便的口服液。为尊重临床应用实际，本研究各药材仍以水提法为主要工艺路线，通过单因素正交设计结合正交试验的方法，以栀子苷含量和固含物为指标，对益智安神口服液提取工艺进行研究，为益智安神口服液的临床应用提供实验依据。

1 仪器与材料

依利特UV230Ⅱ型高效液相色谱仪（DAD检测器，二元泵；大连依利特仪器有限公司）；DZTW型电子调温电热套（天津市静海县工兴电器厂）；BSA224S-CW电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；DZF-6050型真空干燥箱（北京中兴伟业仪器有限公司）；HH-S6型恒温水浴锅（北京科伟永兴仪器有限公司）。

益智、三七、川芎、郁金、栀子等购自于四川省中药材公司，经四川省医学科学院药剂科何林主任药师鉴定，符合2015年版《中国药典》相关项下要求；栀子苷（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号：097F-59P7）；乙腈、甲醇均为色谱纯（GR，SIGMA-ALDRICH）。

2 方法与结果

2.1 固含物测定

按正交试验所得的提取液浓缩至60 mL左右，精密吸取3 mL，移至恒重蒸发皿中，水浴蒸干至膏状，残渣再于105 ℃烘箱中干燥3 h，取出，迅速移至干燥器中冷却至室温，精密称定质量。

2.2 栀子苷含量测定

2.2.1 色谱条件 采用Agilent C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），以乙腈-水（15：85）为流动相，检测波长为238 nm，流速为1 mL．min-1，进样量10 μL。

2.2.2 溶液的制备 对照品溶液的制备：精密称取栀子苷对照品4.03 mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.403 g．L-1的对照品溶液。

供试品溶液的制备：分别取益智安神口服液提取液1 mL，置于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，待用。

阴性样品制备：按处方组成与比例，除去栀子药材，按工艺要求制得不含栀子的益智安神口服液阴性样品，再按照方法制成阴性样品溶液。

2.2.3 标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液，进样分析，测定峰面积。以峰面积积分为纵坐标，对照品进样量为横坐标，得回归方程为y=1222.2x-33.44（r2=0.9994），表明栀子苷在0.403～2.015 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.2.4 精密度试验 精密吸取0.0806 g．L-1栀子苷对照品溶液10 μL，按“2.2.1”项下色谱条件进样，平行测定6次，记录峰面积，栀子苷平均峰面积RSD为0.2431%（n =6），表明仪器精密度良好。

2.2.5 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液分别在0.5，1，1.5，2h进样10 μL，记录峰面积，栀子苷峰面积RSD为0.6385%，表明供试品溶液在2 h内稳定。

2.2.6 重复性试验 精密移取同一提取液6份，按照“2.2.2”项下的方法处理，分别进样10μL，记录峰面积。栀子苷峰面积RSD为0.724%（n=6），表明样品处理方法重复性良好。

2.2.7 加样回收率 精密吸取3份已知栀子苷含量为13.98 g．L-1口服液10 mL，稀释成100倍，取2 mL稀释液，再加入0.12019 g．L-1的栀子苷对照品2 mL，混合，摇匀，按照“2.2.1”项下色谱条件进行测试，栀子苷的平均加样回收率为100%，RSD为0.2757%（n=3）。

表1 加样回收率

2.2.8 样品栀子苷含量测定 精密吸取正交试验安排表下各样品适量，按照供试品溶液样品处理方法处理后，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，按照“2.2.1”项下色谱条件进样分析。

2.3 挥发油提取工艺优选

处方中益智、川芎及郁金含挥发油[1-4]，其挥发油的作用广泛，应先对其进行提取。根据预实验结果，称取益智50 g，加入1500 mL水，浸泡一小时后分别加入郁金100 g，继续浸泡2 h后，再分别加入川芎100 g，接上冷凝管和挥发油提取器开始加热提取，收集挥发油，并记录时间及挥发油收集的量。结果显示，从第4 h开始，随着时间的增加，挥发油的量不再增加，故益智、川芎、郁金挥发油提取最佳时间为4 h。

表2 提取时间的选择结果

2.4 水提取工艺参数研究

2.4.1 正交试验设计 以水为提取溶媒，选取加溶媒量（A）、提取时间（B）、提取次数（C）为考察因素，以栀子苷含量及固含物量为考察指标（二者的加权比例设定为7：3），采用L9（34）正交表安排试验。提取工艺优选因素水平见表3。称取处方量三七、栀子等[5]，与挥发油提取后的药渣，按照表3安排试验。试验结束后收集提取液，混匀并测定栀子苷及固含物。

表3 提取工艺因素水平表

2.4.2 结果分析 通过方差分析表可知，各因素影响顺序为C＞A＞B，其中提取次数、溶媒用量对提取效果显著性影响，其它因素对总权重显著性差异不显著。根据正交试验直观分析，确定药材的最佳提取工艺为A3B3C3，但考虑到B因素显著性差异不显著，实验时间过长，故选择最佳工艺条件为A3B2C3，即加10倍量水，提取2次，每次提取时间2 h。

表4 益智安神口服液正交试验分析

表5 正交试验方差分析表

2.4.3 方法验证实验 称取处方量益智、郁金、川芎，按比例加水煎煮，收集挥发油，再称取处方量三七、栀子等[4]，分别与挥发油提取后的药渣，按最佳提取工艺条件A3B2C3进行3次验证试验，实验结果见表6，说明优选工艺的提取工艺稳定可行、重复性好。因此，确定最佳提取工艺为A3B2C3。

表6 验证性试验结果

3 讨论

本方为临床经验方，在临床使用时直接用水煎服，在煎煮的过程中，挥发油可能随水蒸气挥发而丢失。我们根据不同药物所含成分的化学性质，在工艺研究过程中，采用挥发油提取。据报道，益智挥发油具有抑制乙酰胆碱酯酶活性[6]、抗氧化[7]、增加神经递质释放[8]等作用，川芎挥发油具有对抗中枢神经缺血损伤、改善学习记忆能力等作用[9]，因此，在工艺研究过程中，对挥发油进行富集利用，有利于提高制剂临床疗效。

益智安神口服液为成都中医药大学附属医院临床协定处方，前期药理研究证实[5]，益智安神液可改善东莨菪碱致记忆获得性障碍模型小鼠的学习记忆能力，有较好的益智作用。我们在提取工艺研究过程中，以栀子苷提取量及固含物量作为指标对提取工艺参数进行筛选，固含物可以从宏观上表征提取液中药物成分的量，以栀子苷个体成分去表征化学成分提取量，以加权评分的方式进行综合评价，从而达到对提取工艺进行评价的目的。通过综合考察选取的提取工艺重复性好，可操作性强。

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(责任编辑：何瑶)

Research on extraction process of Yizhi Anshen oral liquid

/WU Wen-bin1,2, XIE Shu-ling2, LEI Ming1,2, ZHANG Ting-mo2, ZHANG Wen-wen3//(1. Teaching Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072, Sichuan; 2.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, Sichuan;3.Chengdu University, Chengdu 610044, Sichuan)

Objective:To optimize the extraction process of Yizhi Anshen oral liquid.Method:Geniposide content and composite score of solid content were selected as indexes, and extraction volume of volatile was selected as factor to design single factor experiment. The amount of solvent, time and times of extraction were considered as the indicators to optimize the extraction technology of Yizhi Anshen oral liquid by L9(34) orthogonal test.Result:The optimum extraction process was using six volume water of Yizhi, Yujin and Chuanxiong, extracting 4 hours, and collecting the volatile; then mixing the dregs with Sanqi and Zhizi, extracting with 10 volume water 2 times, 2 hours for each time. The average extraction of geniposide was 3313.90 mg with relative standard deviation of 2.10% (n=3). The average content of solid content was 73.12 g with relative standard deviation of 2.36%(n=3).Conclusion:Qualified and stabilized production can be made by the optimized extraction process which can be applied as the preparation technology of Yizhi Anshen oral liquid.

Yizhi Anshen oral liquid；preparation process；geniposide；solid content；single factor test；orthogonal experiment

R 283.6

A

1674-926X(2016)05-008-04

1.成都市科技惠民计划项目（益智安神液工艺质量标准研究）；2.成都市科技计划项目（益智安神液治疗老年性痴呆的应用基础研究，12DXYB307JH）

1 成都中医药大学附属医院 四川 成都 610072；

2 成都中医药大学 四川 成都 610075；

3成都大学 四川 成都 610044

伍文彬（1981-），男，博士，博士后，副教授，硕士研究生导师，研究方向：中医药防治老年病基础与临床研究

Tel：028-87765509 Email：wwb1201@vip.sina.com

2016-01-07