GFAP单克隆抗体制备及ELISA检测方法研究

王 珂， 张守涛， 郭亚楠

(郑州大学 生命科学学院 河南 郑州 450001)

GFAP单克隆抗体制备及ELISA检测方法研究

王 珂， 张守涛， 郭亚楠

(郑州大学 生命科学学院 河南 郑州 450001)

制备抗胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP) 单克隆抗体，并尝试建立双抗夹心ELISA 检测方法，为出血性脑卒中早期诊断提供基础材料.用重组人GFAP作为抗原免疫BALB/C小鼠，通过杂交瘤技术制备抗GFAP单克隆抗体；用HRP标记单克隆抗体，ELISA 和Western blot检测抗体的亚类、表位和特异性；采用ELISA 技术制备GFAP检测试剂盒.获得了7株抗GFAP单克隆抗体，抗体亚类为IgG2或IgG1，抗体特异性好.抗体配对成功，ELISA检测重组人GFAP灵敏且稳定.

GFAP； 出血性脑卒中； 抗体； 酶联免疫吸附检测

0 引言

胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)是分子量为55 kDa的胞浆蛋白，最初从慢性多发性硬化症患者的白质斑块中发现[1].进一步研究发现，GFAP蛋白至少含有以下3个功能域：氨基端“头部”、羧基端“尾部”和中部螺旋杆状区，属于III型中间丝蛋白家族[2].大鼠、小鼠和人的GFAP基因已被克隆并测序，序列比对显示，大鼠、小鼠和人的GFAP高度同源.其中，人的GFAP基因定位于染色体17q21区域[3].GFAP基因含有9个外显子和8个内含子，还有4个可选择的外显子和2个可选择的内含子[4].截至目前，共计发现人类6种不同的GFAP转录本，其中第一个被发现、表达量最高的是GFAPα.大部分描述GFAP表达及其调控的论文包括本研究实际上指的是GFAPα[1,3].

星形胶质细胞(astrocyte，AS)广泛分布于中枢神经系统各个部位，约占正常成年人脑细胞总数的40%[5].GFAP则是星形胶质细胞特有的中间丝蛋白.研究发现星形胶质……