蛇床子三螺旋转录因子基因的克隆与表达分析

王希强, 尹登科, 储　俊， 吴家文

(1． 安徽中医药大学 科研实验中心 新安医学教育部重点实验室, 合肥 230038；2. 安徽中医药大学 药学院, 合肥 230038)

蛇床子三螺旋转录因子基因的克隆与表达分析

王希强1, 2, 尹登科2, 储俊1， 吴家文1

(1． 安徽中医药大学 科研实验中心 新安医学教育部重点实验室, 合肥 230038；2. 安徽中医药大学 药学院, 合肥 230038)

摘要研究的目的是克隆中药蛇床子[Cnidium monnieri (L.) Cuss.]三螺旋转录因子(Trihelix transcription factor，ttf)基因，诱导、鉴定其蛋白体外表达，并利用生物信息学方法分析该蛋白的结构和性质。主要采用RT-PCR方法扩增目的基因，连接到pMDTM19(Simple)-T克隆载体中，核酸序列鉴定正确后再将目的基因克隆到pET-22b(+)表达载体上，将获得的重组质粒转化到大肠杆菌E.coli BL21细胞中，以不同浓度的诱导剂诱导其表达，进一步利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹方法检测目的蛋白的表达情况，并利用各种生物学软件对目的蛋白进行生物信息学分析。结果获得了ttf，构建了该基因的克隆和表达重组质粒，该基因在大肠杆菌BL21中能够被诱导表达，Western Blot结果表明，在预计的分子质量21 ku位置得到了目的蛋白；生物信息学分析表明，目的蛋白为可溶性蛋白，可能定位于细胞核和线粒体中；部分区域极有可能形成卷曲螺旋。研究首次成功体外克隆并在原核生物中表达了蛇床子三螺旋转录因子，并对其进行了系统的生物信息学分析，为进一步研究其结构和功能奠定了基础。

关键词蛇床子；三螺旋转录因子；基因克隆；蛋白质表达；生物信息……