HnRNPA2/B1shRNA慢病毒载体感染Hela细胞的稳定株筛选*

刘　瑶， 石　祥， 方　文*

(贵州医科大学 临床生化教研室， 贵州 贵阳　550004)

·专题研究·

HnRNPA2/B1shRNA慢病毒载体感染Hela细胞的稳定株筛选*

刘瑶**， 石祥， 方文***

(贵州医科大学 临床生化教研室， 贵州 贵阳550004)

[摘要]目的： 筛选不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/B1)的短发夹RNA (shRNA)慢病毒载体感染宫颈癌细胞株Hela细胞的稳定细胞株。方法: 利用hnRNPA2/B1 shRNA 慢病毒载体转染Hela细胞，采用嘌呤霉素抗性方法筛选稳定转染的Hela细胞系；将Hela细胞分为空白组(Hela)、阴性组(NC-shRNA)、干扰组1(shRNA1)、干扰组2(shRNA2)、干扰组3(shRNA3)和干扰组4(shRNA4)，实时荧光定量 PCR(RT-PCR)检测各组细胞hnRNPA2/B1 mRNA表达水平，Western blot检测hnRNPA2/B1蛋白表达水平，筛选干扰沉默效率最高的细胞作为稳定沉默hnRNPA2/B1基因的稳转株。结果: 经筛选获得稳定转染的宫颈癌Hela细胞株，干扰组2，干扰组3和干扰组4与空白组比较，hnRNPA2/B1基因和蛋白表达量降低，差异有统计学意义(P<0.05)，其中干扰组4沉默效率最高。结论: 成功构建hnRNPA2/B1 shRNA 慢病毒载体感染的Hela稳定细胞株。

[关键词]RNA干扰； 短发夹RNA； 宫颈癌； Hela细胞； 慢病毒；不均一核糖核蛋白基因

在全球女性恶性肿瘤中，宫颈癌的发病率仅次于乳腺癌，严重威胁着女性的健康[1]。化疗在恶性肿瘤治疗中占据着不可替代的地位，但其对大多数恶性肿瘤的疗效不佳。本课题组前期用洛铂作用宫颈癌细胞，用双向电泳及质谱技术分析鉴定差异表达蛋白，发现不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneous nuclear ribonucleoproteinA2/B1, hnRNPA2/B1)表达下调[2]。HnRNPA2/B1 是一组参与基因转录与翻译的前体mRNA结合蛋白，它的异常表达可使基因表达过程失去正常调控，导致正常细胞发生癌变[3]。有实验表明干扰hnRNPA2/B1会增加抗癌药物对胰腺癌细胞的敏感性[4]。本课题组前期成功构建了hnRNPA2/B1短发夹RNA (short hairpin RNA, shRNA)的重组慢病毒质……