嗜线虫致病杆菌YL001 cpxR基因敲除突变株的构建及其抑菌活性研究

汤　倩,张淑静,郭蔷薇,王永宏,张　兴

(西北农林科技大学 无公害农药研究服务中心/陕西省生物农药工程技术研究中心，陕西 杨凌712100)

嗜线虫致病杆菌YL001cpxR基因敲除突变株的构建及其抑菌活性研究

汤倩,张淑静,郭蔷薇,王永宏,张兴

(西北农林科技大学 无公害农药研究服务中心/陕西省生物农药工程技术研究中心，陕西 杨凌712100)

[摘要]【目的】 通过同源重组技术敲除嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdus nematophila) YL001中cpxR基因，为进一步研究CpxR调节子调控抗菌物质产生的机理奠定基础。【方法】 通过融合PCR技术，将cpxR基因的上、下游同源片段及质粒pJCV53上的卡那抗性基因Kmr 3个片段连接，克隆到自杀载体pDM4中，将重组质粒转化到大肠杆菌S17-1λpir中，经接合转移导入嗜线虫致病杆菌内，通过同源重组敲除cpxR基因；采用琼脂扩散法和抑制菌丝生长速率法分别测定突变菌株对枯草芽孢杆菌和番茄灰霉病菌的抑制作用。【结果】 从X.nematophila YL001基因组中成功敲除cpxR基因，得到了ΔcpxR突变菌株；ΔcpxR突变菌株对枯草芽孢杆菌和番茄灰霉病菌的抑制作用较野生菌株分别提高了1.4和1.7倍。【结论】 CpxR负向调控嗜线虫致病杆菌YL001抗菌物质的产生。

[关键词]嗜线虫致病杆菌YL001；cpxR基因；基因敲除；抗菌活性

嗜线虫致病杆菌存在于昆虫病原线虫肠道内，与斯氏线虫(Steinernema)共生，属肠杆菌科革兰氏阴性细菌[1]，其在代谢过程中会产生多种具有生物活性的抗生素类物质，如细菌素、几丁质酶、假肽类、二硫吡咯类等[2]。这些代谢产物不仅具有多种化学结构，而且在医药和农业上具有广泛的生物活性，如抗细菌、抗真菌、杀虫、杀线虫、抗溃疡、抗肿瘤和抗病毒活性等。……