坦布苏病毒NS1蛋白的表达及ELISA检测方法的建立

提金凤，李志杰，李秀丽，张敏敏，张媛媛，刁有祥*



坦布苏病毒NS1蛋白的表达及ELISA检测方法的建立

提金凤1，2，李志杰2，李秀丽1，张敏敏1，张媛媛1，刁有祥1*

（1.山东农业大学动物科技学院，泰安271018；2.山东畜牧兽医职业学院，潍坊261061）

摘 要：为了建立坦布苏病毒（TMUV）感染鸭群的抗体检测方法，以TMUV NS1的原核表达蛋白质作为包被抗原，建立了间接ELISA方法，并对该方法进行了检测条件的优化。将TMUV NS1全基因序列克隆至pET－28a（＋），利用BL21（DE3）表达NS1蛋白，纯化后其质量浓度为4.16μg·μL－1。通过方阵试验，确定了NS1蛋白的最佳包被质量浓度是100ng·孔－1，检测血清的最佳稀释倍数为40倍。随后对检测条件进行了优化，优化后的结果：抗原的最佳包被条件是4℃作用过夜；酶标二抗的最佳工作条件是稀释5 000倍，37℃作用1h；阴阳血清的临界值为0.278。一系列试验验证了该检测方法具有很强的特异性、敏感性、重复性。对采集自山东各地的80份血清样品进行检测，其检测结果显示，该方法与经典的鸡胚中和试验检测结果的符合率为93.5%以上，且比传统的中和试验更敏感。对TMUV感染鸭群的血清进行检测，描述了TMUV感染后鸭群抗体水平的消长规律，为该病的防治提供重要的理论依据。以NS1蛋白为包被抗原的间接ELISA方法的建立为临床上TMUV的感染提供了一种新的抗体检测方法，尤其是在TMUV早期感染的检测方面有着更为广泛的应用前景。

关键词：鸭坦布苏病毒；NS1蛋白；间接ELISA；检测方法

坦布苏病毒（Tembusu virus，TMUV）感染是近年来新出现的一种以水禽感染为主的病毒性传染病，产蛋鸭感染后主要表现为产蛋率下降，出血性卵巢炎；……