普通小麦转录因子基因TaWRKY35的克隆及功能分析

刘自成，苗丽丽，王景一，杨德龙，毛新国，景蕊莲

（1甘肃农业大学生命科学技术学院，兰州 730070；2中国农业科学院作物科学研究所/农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程/农业部农作物种质资源创新与利用重点开放实验室，北京 100081）



普通小麦转录因子基因TaWRKY35的克隆及功能分析

刘自成1,2，苗丽丽2，王景一2，杨德龙1，毛新国1,2，景蕊莲2

（1甘肃农业大学生命科学技术学院，兰州 730070；2中国农业科学院作物科学研究所/农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程/农业部农作物种质资源创新与利用重点开放实验室，北京 100081）

摘要：【目的】非生物逆境是制约小麦生产的主要因素。WRKY转录因子是植物特有的转录因子家族，参与对多种非生物逆境胁迫的应答。普通小麦基因组中至少含有200个WRKY，目前仅对少数成员的功能进行了鉴定。通过克隆小麦 WRKY转录因子 TaWRKY35并揭示其功能，为改良小麦的抗逆性提供基因资源。【方法】利用小麦全长cDNA数据信息，从强抗旱小麦品种旱选10号中克隆逆境胁迫应答转录因子基因TaWRKY35；采用实时定量PCR技术，分析目标基因在不同发育时期、不同组织器官中的表达水平，以及在PEG-6000、NaCl、ABA和低温等逆境胁迫下的表达模式；构建目标基因与GFP融合的表达载体，转化小麦原生质体，以确定目标蛋白在细胞中的作用位置；构建TaWRKY35过表达载体，通过农杆菌介导的方法转化拟南芥，揭示目标基因的功能。【结果】TaWRKY35的开放阅读框全长1 134 bp，编码377个氨基酸的蛋白。TaWRKY35的N端有一个典型的WRKY结构域，C端有一个C2HC型的锌指结构域，属于WRKY家族第Ⅲ亚家族。……