蒰柑原生质体培养过程中羟自由基和总活性氧水平的分析

徐小勇++许晓玲++刘玉玲

摘要：以椪柑愈伤组织和试管苗为材料，通过酶解分离原生质体，于液体培养和观察；采用羟自由基测定试剂盒和电子顺磁共振技术分析羟自由基变化，通过流式细胞仪检测总活性氧水平变化。结果发现，培养的前3 d，愈伤组织原生质体羟自由基和总活性氧水平下降，而叶肉原生质体则升高；培养的后3 d，除愈伤组织原生质体羟自由基水平升高外，其他都下降。椪柑叶肉原生质体可能由于氧化胁迫引起死亡，而愈伤组织原生质体能较好地控制总活性氧水平从而顺利进入再生，另外培养6 d时其羟自由基含量的升高可能与细胞壁再生等有关。

关键词：椪柑；原生质体；羟自由基；活性氧

中图分类号： S666.104+.3文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）05-0196-03

原生质体指采用机械法或酶解法去除细胞壁的裸露细胞，是研究植物生命理论基础问题的理想体系，还可对其进行各种细胞及遗传操作。因此，原生质体技术已广泛地用于植物体细胞杂交、遗传转化、种质资源保存、基因瞬时表达等方面。在柑橘植物上，原生质体培养及体细胞杂交技术为其遗传育种工作开辟了一条新思路，它已成为柑橘砧木及接穗品种改良的重要手段[1-2]。目前，柑橘原生质体主要从愈伤组织和叶片分离得来，但只有愈伤组织分离的原生质体可再生成植株，而叶肉原生质体目前尚不可分裂再生，还不能用于柑橘遗传改良[3-4]。迄今，这2种类型原生质体再生能力差异的机制尚不清楚。……