实时荧光LAMP技术快速检测变形杆菌

马桂芬，张蕴哲，付博宇，袁耀武，苑宁，王鑫，张伟，*（．河北农业大学食品科技学院，河北保定07000；.河北农业大学理工学院，河北沧州06000）



实时荧光LAMP技术快速检测变形杆菌

马桂芬1，张蕴哲1，付博宇1，袁耀武1，苑宁2，王鑫2，张伟1，*
（1．河北农业大学食品科技学院，河北保定071000；2.河北农业大学理工学院，河北沧州061000）

摘要：建立一种快速检测变形杆菌的方法。采用实时荧光LAMP（RealAmp）技术检测变形杆菌，分析GenBank中公布的变形杆菌atpD基因序列，针对其6个区域设计4条引物，利用实时荧光监测仪等温（62℃）扩增模板DNA，通过与电脑相连进行实时监测，对该方法检测变形杆菌的特异性、灵敏度、人工污染猪肉检出限等方面进行研究，并将该检测法的灵敏度与普通环介导等温扩增（LAMP）检测法进行比较。结果表明，RealAmp检测方法比普通LAMP检测方法更加方便快捷，20min内即可判定结果；用于特异性试验的19株试验菌株中，6株变形杆菌呈阳性结果，其他13株非变形杆菌均呈阴性结果；检测纯菌的灵敏度为8.1CFU/mL，是普通LAMP检测方法的10倍；人工污染猪肉的检出限为81CFU/mL。本研究建立的RealAmp检测方法操作简单，耗时短，特异性强、灵敏度高，能够实现对变形杆菌的快速检测。

关键词：实时荧光LAMP；LAMP；变形杆菌；检测；atpD基因

当前全球性食品安全问题受到的关注越来越多，世界卫生组织将控制食品污染和食源性疾病列为优先重点战略工作领域。变形杆菌是一种食源性条件致病菌，吃剩下的食物、食品沙拉和一些豆类制品，还有动物的内脏及肉、蛋类等一系列食品都很容易被变形杆菌污染，从而导致食物中毒。……