贝尼地平对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化体外研究

马忠平 黄健 张志峰 杨云 叶楠

内蒙古医科大学第二附属医院关节外科，呼和浩特 010030

国内外众多研究报道，高血压与成骨异常存在着密切的联系[1]，高血压患者的骨丢失明显加重，而钙从骨质中流失也相应加速，此外高血压引起的继发性骨质疏松近年来成为科学研究的热点问题[2-3]，为现代骨代谢研究提供了重要线索。贝尼地平(benidipine，BD)作为临床上常用降血压药物，其作用机制主要是抑制血管平滑肌上的L型电压依赖性钙通道蛋白开放，以此阻断钙离子在血管平滑肌细胞中的聚集，从而舒张血管平滑肌并降低血压[4]，但该药物在骨代谢中的研究报道甚少。本研究旨在通过体外实验观察贝尼地平在骨代谢中的具体作用，并探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

取原代BMSCs所用的雌性4周大C57/BL6小鼠，体重10～15 g，购至内蒙古农业大学实验动物中心；主要实验仪器与试剂：(1)主要仪器：倒置光学显微镜(Nikon，TE2000-U),(2)主要试剂：一抗Runx2(CST公司)，一抗OCN(CST公司)，一抗GAPDH(CST公司),一抗β-catenin(CST公司)，一抗LRP5(CST公司)，ALP染色试剂盒(碧云天生物试剂公司)，Caspase-8比色测定工具包(凯基生物公司)，贝尼地平(Sigma公司)，α-MEM(Hyclone公司)，胎牛血清(Gibco公司)。

1.2 BMSCs的提取与培养

小鼠寰枢椎脱臼处死后75%酒精浸泡消毒5分钟，在超净台中用眼科剪和眼科镊剥开小鼠皮肤，从髋臼关节处取下小鼠双下肢，PBS清洗掉粘连毛发，剥离附属肌肉等软组织整理出股骨，浸泡于α-MEM基础培养基中，用一套新的灭菌眼科剪和眼科镊剪开股骨双侧骨端暴露骨髓腔，用1 ml注射器吸取10% FBS的……