模拟水样中甲肝病毒超滤浓缩和PEG浓缩方法的比较

赵霖　周文亭　曹经瑗　毕胜利

102206 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所



模拟水样中甲肝病毒超滤浓缩和PEG浓缩方法的比较

赵霖周文亭曹经瑗毕胜利

102206 北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

【摘要】目的比较模拟水样中甲肝病毒(HAV)超滤浓缩和PEG浓缩方法，为水中HAV检测提供参考。方法向模拟水样中接种已知量的HAV，分别选用Millipore和Sartorius公司的100KD和50KD孔径的微孔超滤管及终浓度为10%聚乙二醇(PEG)-1M氯化钠(NaCl)沉淀的方法对模拟水样进行浓缩，采用荧光定量RT-PCR方法检测浓缩后的病毒量，用SPSS21.0对数据进行统计学分析。结果采用同一孔径不同厂家的超滤管浓缩病毒无统计学差异 (P=0.25，P=0.532),对浓缩后的CT值及回收量进行分组比较，结果均表明不同处理方法有统计学差异(P=0.000<0.05，P=0.000<0.05)，其中50KD组浓缩病毒回收率为(94.57±16.26%)，100KD组浓缩病毒回收率为(52.37±14.75%)，10%PEG-1.0MNaCl沉淀病毒回收效率为(63.5±8.45%)。结论超滤和PEG沉淀两种方法均可用于水样中HAV浓缩，超滤管浓缩病毒操作简便，耗时更短，选择合适孔径可以提高HAV病毒回收率,本实验中50KD超滤管HAV回收率高于100KD；PEG更适用处理大体积样本。

【主题词】甲肝病毒；病毒浓缩；PEG浓缩；超滤； 荧光定量RT-PCR

近年来肠道病毒导致的疾病时有发生，如：胃肠炎、肝炎等，严重威胁人类健康。其中，甲型肝炎病毒(hepatitis A virus，HAV)属微小RNA病毒科，肝病毒属，能够通过受污染的水和食物经粪口途径传播，临床上以疲乏、食欲减退、肝肿大、肝功能异常为主要表现，部分病例出现黄疸，主要表现为急性肝炎。HAV通常在受污染环境水体中的病毒浓度较低，难以直接检测，细胞培养可以用于分离培养HAV，但此方法存在操作繁琐、细胞培养周期长等缺点。常通过各种物理方法，对大量水体中的病毒进行浓缩和富集来提高样品中HAV病毒浓度[1]。国内外已经报道了多种病毒浓缩方法，如阴阳离子膜……