miR-202调控GLI-2干预肺癌A549细胞的增殖和凋亡

杨丽　王霞　杨永静　罗莉　李长桂　孙晓容　胡明冬



miR-202调控GLI-2干预肺癌A549细胞的增殖和凋亡

杨丽王霞杨永静罗莉李长桂孙晓容胡明冬

400037 重庆，第三军医大学新桥医院呼吸内科

【摘要】目的探讨miR-202对肺癌A549细胞增殖和凋亡的调控作用及其相关机制。方法培养肺腺癌A549细胞和肺正常上皮BEAS-2B细胞，利用Real time-PCR检测miR-202在上述细胞中的表达水平；合成并将miR-202 minic和miR-NC转染进入A549细胞后，应用MTT检测12、24、48 h时细胞的抑制率，使用流式细胞术检测转染后48 h细胞的凋亡情况，利用western blot检测GLI-2蛋白的表达情况；构建野生型和突变型GLI-2 3′UTR 插入pMIR-REPORTTMluciferase vector载体，并将其与pRL-TK质粒共转染进入A549细胞，之后分别将等量的pre-miR-202和miR-NC再转染进入A549细胞，利用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测萤火虫和海肾荧光素酶活性。结果miR-202在A549细胞中的相对表达量显著低于在BEAS-2B细胞中的表达量(P<0.01)；miR-202 minic组在12、24、48和72 h的细胞抑制率显著高于对照组和miR-NC组(P<0.01)；miR-NC组在72 h时细胞抑制率显著高于对照组(P<0.01)。此外， miR-202 minic组细胞凋亡率显著高于miR-NC和对照组(P<0.01)，并且miR-NC组的细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。荧光素酶报告基因结果说明GLI-2是miR-202的靶基因。miR-202minc转染A549细胞后可显著降低GLI-2蛋白的表达，而miR-NC组与对照组相比较，GLI-2蛋白表达无显著差异。结论miR-202通过下游靶基因GLI-2调控肺癌A549细胞的增殖和凋亡，其可作为治疗肺癌的潜在靶点。

【关键词】miR-202；支气管肺癌；GLI-2；细胞增殖；细胞凋亡

肺癌严重威胁着人类的生命健康，在过去的几十年，随着人口老龄化、污染以及各种致癌物质的被动摄入增加，导致肺癌的发生率逐年升高[1-3]。尽管近年来诊疗手段的不断发展，但是肺癌患者5年生存率仍低于15%[4-5]。因此，亟待探索新的治疗策略和方法。

microRNAs (miRNAs)是普遍存在于细胞内、仅有18-25bp的非编码RNA。miRNA主要功能是通过与其mRNA的3′端非编码区(untranslated region, UTR)结合，抑制靶mRNA的翻译或直接降解mRNA，从而抑制靶蛋白的表达及其功能[6]。近年来对miRNA的研究表明，其在肺癌的发生发展中发挥着重要作用[7]。既往研究表明，上调miR-202可抑制LRP6蛋白的表达，进而抑制肝细胞癌的增殖[8]。在多发性骨髓瘤中，miR-202发挥着负性调节细胞生存、增殖和粘附的功能[9]，但是miR-202在肺癌中发挥何种作用尚不清楚。……