SNP位点rs6983267相关非编码RNA G/U对结肠癌细胞转移活性的影响

蔡文臣，郝小惠，沈阳丽，孟晨雪，田洁，郭志义

(华北理工大学医学实验研究中心，河北唐山063000)



SNP位点rs6983267相关非编码RNA G/U对结肠癌细胞转移活性的影响

蔡文臣，郝小惠，沈阳丽，孟晨雪，田洁，郭志义

(华北理工大学医学实验研究中心，河北唐山063000)

目的 探讨染色体8q24区域中单核苷酸多态性(SNP)位点 rs6983267相关非编码RNA G/U对结肠癌细胞转移活性的影响。方法 运用生物信息学方法分析SNP rs6983267位点的非编码RNA；收集KM12C和KM12SM细胞，提取细胞总RNA，逆转录和PCR扩增，片段回收后用Tsp45Ⅰ进行酶切，对酶切(酶切组)和不做酶切(对照组)的模板做PCR扩增分析。通过限制性内切酶-PCR方法检测两组SNP rs6983267位点的非编码RNA G/U相对表达量；KM12C和KM12SM细胞分别进行pGL3-Gs-LUC(pGL3-Gs-LUC组)、pGL3-Ts-LUC(pGL3-Ts-LUC组)和pGL3-Basic-LUC质粒转染，应用双荧光素酶报告基因方法检测两组KM12C和KM12SM细胞中rs6983267非编码RNA启动子活性。结果 ENCODE数据库显示，染色体8q24区域SNP rs6983267位点附近存在非编码基因。KM12C细胞中酶切组、对照组SNP rs6983267位点相关非编码RNA G/U为0.80±0.10、5.60±1.30，KM12SM细胞中分别为0.71±0.09、1.43±0.11。与对照组比较，KM12C细胞中酶切组SNP rs6983267位点相关非编码RNA G/U差异无统计学意义(P﹥0.05),KM12SM细胞中升高(P<0.05)。KM12C细胞中，pGL3-Gs-LUC组、pGL3-Ts-LUC组rs6983267位点相关G型与T型非编码RNA启动子相对活性分别为0.81±0.14、0.82±0.25，KM12SM细胞中分别为1.00±0.26、1.85±0.58。在KM12SM细胞中，两组比较，P<0.05；在KM12C细胞中，两组比较，P﹥0.05。结论 SNP rs6983267位点相关非编码RNA G/U可能与结肠癌细胞的转移活性相关。

结肠肿瘤；肿瘤转移；单核苷酸多态性；rs6983267；非编码基因

结肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤，其发病率和病死率在所有恶性肿瘤中占第3位[1]。近年，我国结直肠癌发病率也在不断升高，目前已高达31/10万。全基因组关联分析研究表明，位于8q24染色体上的SNP 位点rs6983267与结肠癌的发生高度相关[2]。染色体8q24区为基因沙漠区，大范围缺少蛋白质编码基因。有研究报道，SNP rs6983267可以作为增强子[3～5]，也可以作为非编码基因发挥作用，如CCAT2。长链非编码RNA (LncRNA)一般指转录长度大于200 nt的非编码RNA[6,7]。……